[发明专利]基于突变-编码文库的高通量筛选方法在审
| 申请号： | 201910964223.2 | 申请日： | 2019-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN110616252A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 胡欣;邵志敏;陈力 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 31287 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 于晓菁 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种基于突变‑编码文库的高通量筛选方法，包括将含有人全长基因突变的载体和含有特异性条形码的载体通过LR反应构建重组载体，之后转导入宿主细胞中，经过抗性筛选处理，抗药性实验，提取基因组，PCR纯化和测序处理的步骤；本发明针对功能性突变的高通量筛选这一空白领域，原创性地建立了突变编码高通量文库技术，能够准确、高效地挖掘功能性突变，从而为突变数据的精准解读提供有力的平台保障，对临床的诊断和发现靶向治疗的靶点具有重要指导意义。 | ||
| 搜索关键词： | 突变 高通量筛选 分子生物学技术 靶向治疗 编码文库 抗性筛选 全长基因 宿主细胞 突变编码 突变数据 文库技术 重组载体 抗药性 条形码 高通量 基因组 靶点 测序 构建 解读 诊断 挖掘 发现 | ||
【主权项】：
1.一种基于突变-编码文库的高通量筛选方法，包括如下步骤：/n(1)将目的的人全长基因编码区克隆到载体pENTR载体上，采用安捷伦公司二QuikChange II特异性位点突变试剂盒针对特定突变位点进行定点突变，获得含有人全长基因突变的载体；将特异性条形码克隆到逆转录载体上，获得含有特异性条形码的载体；将所得含有人全长基因突变的载体和所得含有特异性条形码的载体通过LR反应进行重组，构建出一系列重组载体；/n(2)将所得一系列重组载体等比例混合，转导入宿主细胞中，经过抗性筛选处理，得到含有突变基因的混合细胞文库；/n(3)对所得含有突变基因的混合细胞进行生长以及抗药性实验，之后提取基因组，并进行PCR纯化处理，然后对所得纯化产物进行测序处理。/n
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- 本发明涉及分子生物学技术领域，且公开了基于毛细管电泳法定量检测FLT3‑ITD基因突变的方法，包括如下步骤：一、材料及试剂的准备，购入实验操作中所需的DNA提取试剂盒、PCR MIX、引物生工合成和甲酰胺；二、检测样本的处理，准备:1‑2ml外周血或骨髓血、DNA/RNA(OD260/280值1.8‑2.0)的血样标本，按照试剂盒中提取DNA的步骤进行相关实验操作。该基于毛细管电泳法定量检测FLT3‑ITD基因突变的方法，具备只需设计一对带有荧光标记的引物即可解决个体差异性问题，且操作简单，便于人们对FLT3‑ITD基因突变的的检测，可用于对具有FLT3‑ITD基因突变的白血病患者的诊断及追踪预后疗效，同时监测MRD的动态变化的优点。
- 一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法-201910860263.2
- 张立波;张宇 - 杭州云鼎基因生物科技有限公司
- 2019-09-11 - 2019-11-29 - C12Q1/6858
- 本发明公开了一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸；本发明所述的检测基因突变的方法与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值。
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