[发明专利]一种沙蚕激酶的提取方法

摘要

本发明涉及一种沙蚕激酶的提取方法，包括沙蚕预处理，添加缓冲液匀浆，挤压过滤，酶解及沙蚕激酶活化，高温除杂，混合分级盐析，先用低浓度的混合盐溶液进行盐析去除杂质，再用高浓度的混合盐溶液进行盐析收集富含目标蛋白的沉淀物；将所得沉淀物进行疏水层析和离子层析，超滤浓缩，冷冻干燥，获得高效价纤溶酶。本发明方法可提高进沙蚕组织中沙蚕激酶的盐析溶出程度及沙蚕激酶活化程度，提升了提取产率及产品效价。本发明方法提取率高，适用于工业化生产。

主权项

1.一种沙蚕激酶的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：将沙蚕添加预冷的磷酸盐缓冲液后匀浆，挤压过滤，收集滤液；向所得滤液中加入碱性脂肪酶，保温酶解并使沙蚕激酶活化，制得酶解液；通常可在酶解后降至常温，过滤得滤液或离心收集上清液，得酶解液；将所得酶解液于55～60℃高温除杂后，将滤液或离心所得上清液用0.5μm微孔滤膜过滤，收集膜过滤液；将所得膜过滤液分级盐析，即先用低浓度的混合盐溶液进行盐析去除杂质，再用高浓度的混合盐溶液进行盐析，离心收集沉淀物；所述用低浓度的混合盐溶液进行盐析去除杂质，其条件为调至盐析溶液中(NH₄)₂SO₄浓度为2.5～3.0g/L，NaCl浓度为7.0～8.0g/L，在温度6～10℃条件下进行搅拌和盐析去除杂质；所述用高浓度的混合盐溶液进行盐析，其条件为调至盐析溶液中(NH₄)₂SO₄浓度为7.0～8.0g/L，NaCl浓度为17.0～19.0g/L，在温度6～10℃条件下进行搅拌和盐析，收集沉淀，获得粗制品；将所得沉淀物依次疏水层析、凝胶过滤除盐层析、离子交换层析，超滤浓缩，冷冻干燥，制得沙蚕激酶。