[发明专利]一种高纯度DNA模板的制备方法在审
| 申请号： | 201910253729.2 | 申请日： | 2019-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN109811034A | 公开（公告）日： | 2019-05-28 |
| 发明（设计）人： | 杨保伟;李怡谰;牛沁雅;盛焕精;曹晨阳;崔生辉;瞿洪仁 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 西安智萃知识产权代理有限公司 61221 | 代理人： | 李炳辉 |
| 地址： | 712100 陕西省咸阳市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种高纯度DNA模板的制备方法，其技术方案是：将培养的菌株置于加入无菌去离子水的PCR管中形成混合菌液，将混合菌液置于PCR仪中高温裂解，后降温冷却；然后在离心机上经12000‑15000rpm离心，吸取上清液，弃除沉淀物，即获得高纯度DNA模板；依据需求将获得的高纯度DNA模板直接或经稀释后加入PCR体系进行PCR扩增。本发明降低了对后续扩增体系、特别是DNA聚合酶活性的影响，菌体高温裂解后再将裂解物冷却，可以使DNA重新快速形成螺旋，获得的DNA模板纯度高、数量多，DNA模板约占混合菌液量的67%‑72%，对后续PCR扩增过程中DNA聚合酶的影响较小，极大的提高了扩增效率，减少了非特异性扩增，制备的DNA模板稳定，克服了现有DNA模板制备方法存在的缺陷。 | ||
| 搜索关键词： | 高纯度DNA 制备 混合菌液 无菌去离子水 离心机 除沉淀物 非特异性 高温裂解 降温冷却 扩增体系 扩增效率 裂解物 上清液 中高温 稀释 菌体 菌株 扩增 裂解 上经 冷却 | ||
【主权项】：
1.一种高纯度DNA模板的制备方法，其特征在于是通过以下技术步骤制备完成的：a.向灭菌的PCR管中加入无菌去离子水，标号注明，另备用同样容积灭菌的PCR管，标号注明；b.将培养的菌株置于加有无菌去离子水的PCR管中形成混合菌液，混合菌液的浊度为0.1‑0.2MCF；c.将装有混合菌液的PCR管置于PCR仪中，在99‑100℃温度下裂解10min，后降温至4℃冷却；d.完成裂解后将PCR管置于冰水中水浴或在4℃冰箱内稳定3‑5min， 然后在离心机上经12000‑15000rpm离心2‑3min，吸取上清液置于备用的PCR管中，弃除沉淀物，即获得高纯度DNA模板，保存于‑40℃冰箱内；e．在使用时，依据需求将获得的高纯度DNA模板直接或经稀释后加入PCR体系进行PCR扩增。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西北农林科技大学，未经西北农林科技大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910253729.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
