[发明专利]一种渗透液与一种根癌农杆菌介导的草莓快速简易稳定遗传转化方法在审
| 申请号： | 201811480483.4 | 申请日： | 2018-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN109517839A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 王静;赵密珍;庞夫花;豆伟涛 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种渗透液与一种根癌农杆菌介导的草莓快速简易稳定遗传转化方法，属于植物生物学技术领域，包括Triton X‑100和Silwet L‑77等。将渗透液与单克隆菌体混合调混合液的OD600值为0.6～1.2，对草莓未开的花蕾侵染，从开花到T1代阳性植株，仅6个月，对比例从取叶片到开花结果得T1代阳性植株至少14个月，本发明缩短8个月。本发明的转化方法中包括浸花后的草莓种子的荧光检测、幼苗抗生素筛选及幼苗荧光检测阳性植株，对T1代植株催芽，长出胚芽的种子检测荧光初步判断阳性种子，再置于抗生素溶液浸湿的滤纸上生长，具有叶柄的小三叶植株时，再通过叶片颜色判断阳性植株，后通过荧光验证阳性植株。 | ||
| 搜索关键词： | 阳性植株 渗透液 草莓 根癌农杆菌介导 稳定遗传 荧光检测 植株 荧光 幼苗 转化 简易 胚芽 叶柄 抗生素溶液 抗生素筛选 植物生物学 浸湿 草莓种子 单克隆菌 叶片颜色 种子检测 花蕾 混合液 催芽 滤纸 侵染 叶片 开花 验证 生长 | ||
【主权项】：
1.一种渗透液，以水为溶剂，包括以下的组分：MS培养基1.5～2.5g/L，蔗糖40～60g/L，Triton X‑100 300～500μL/L，Silwet L‑77 300～500μL/L，6‑苄氨基腺嘌呤15～100μg/L，吲哚丁酸2～10μg/L和乙酰丁香酮200～400mg/L；所述渗透液的pH值为5.0～6.5。
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- 陈华;庄伟建;马世伟;张冲;蔡铁城;邓烨 - 福建农林大学
- 2016-01-15 - 2019-03-12 - C12N15/84
- 本发明涉及特异启动子NtR2驱动AhRESS在花生发状根系产白藜芦醇的方法，属于植物基因工程领域。利用发根农杆菌介导将烟草根特异启动子NTR2驱动花生白藜芦醇合酶基因AhRESS载体pBI121‑NTR2‑AhRESS遗传转化花生，获得特异表达AhRESS的转基因花生发状根。利用有机溶剂浸提法提取转基因花生发状根中白藜芦醇，经高效液相色谱（HPLC）测定，其白藜芦醇含量最高为66.16μg/g（FW），是未转基因发状根中白藜芦醇含量的3倍。本发明为利用烟草根特异启动子驱动花生白藜芦醇合酶基因AhRESS在花生发状根中特异表达，进而生产白藜芦醇提供了良好的基础。
- 黑果枸杞遗传转化体系建立的方法及其应用-201510017117.5
- 任红旭;胡慧霞;舒庆艳 - 中国科学院植物研究所
- 2015-01-13 - 2019-03-01 - C12N15/84
- 本发明公开了黑果枸杞遗传转化体系建立的方法及其应用。本发明所提供的黑果枸杞遗传转化体系建立的方法，包括如下步骤：(1)将含有目的DNA的质粒导入农杆菌得到重组农杆菌；(2)培养重组农杆菌用作转化侵染液；(3)用侵染液浸泡黑果枸杞外植体；(4)将外植体放置于共培养培养基共培养；(5)将共培养后的外植体转移至愈伤组织诱导及筛选培养基上培养，并去除农杆菌；(6)以卡那霉素作为筛选压力，诱导抗性愈伤组织；(7)将抗性愈伤组织转入分化培养基培养，得到丛生芽；(8)诱导生根，即得到黑果枸杞抗性再生苗，抗性苗经PCR鉴定为阳性转基因苗。本发明所提供的黑果枸杞的遗传转化方法，操作简单易行，愈伤组织存活率高。
- 植物作为宿主在表达胰岛素中的应用-201710680888.1
- 王跃驹;马洁 - 北京睿诚海汇健康科技有限公司
- 2017-08-10 - 2019-02-26 - C12N15/84
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及植物作为宿主在表达胰岛素中的应用。本发明利用重组载体以及农杆菌介导真空渗透方法来表达胰岛素(insulin)。该表达体系确定植物外源蛋白在农杆菌侵染4d后就可以收集。利用SDS‑PAGE法、免疫印迹法(Western法)确定重组胰岛素成功表达。细胞增值实验证明生菜生产的胰岛素具有生物学活性。本发明提供了一种低成本、方便、大量生产具有活性重组胰岛素的方法。
- 转CHI基因提高青蒿中青蒿素含量的方法-201610221764.2
- 赵静雅;王路尧;张颖;付雪晴;张婷婷;张利达;钱虹妹;唐克轩 - 上海交通大学
- 2016-04-11 - 2019-02-19 - C12N15/84
- 本发明是一种生物技术领域的转CHI基因提高青蒿中青蒿素含量的方法。本发明从青蒿中克隆查尔酮异构酶CHI基因，构建含CHI基因的植物表达载体，用根癌农杆菌介导，将CHI基因转入青蒿并再生出植株，PCR检测外源目的基因CHI的整合情况，高效液相色谱法及蒸发光散射检测器测定(HPLC‑ELSD)转基因青蒿中青蒿素的含量，筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。本发明获得的转基因青蒿中青蒿素含量有所提升，最高达到非转化对照植株的1.5倍，从而提供了一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，为利用转基因青蒿大规模生产青蒿素打下了基础。
- 一种基于双菌株/双质粒遗传转化柑桔的共转化方法-201510606353.0
- 彭爱红;邹修平;何永睿;许兰珍;雷天刚;陈善春 - 中国农业科学院柑桔研究所
- 2015-09-22 - 2019-01-29 - C12N15/84
- 本发明提供了一种基于双菌株/双质粒遗传转化柑桔的共转化方法，包括外植体预培养，农杆菌浸染步骤，其特征在于：预培养基础培养基为MS培养基，添加4mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）、1mg/L吲哚乙酸(IAA)、100μM乙酰丁香酮（AS）。本发明填补了国内外柑桔多基因共转化的空白，解决了如何实现双菌株/双质粒共转化柑桔的问题。
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