[发明专利]一种磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法

摘要

本发明提供一种用磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法。首先研究了米糠中易被脂肪酶酶解的底物空间结构，筛选出与底物空间结构相似的木瓜蛋白酶等酶，将木瓜蛋白酶进行磁性固定化，提高了其热稳定性，载酶量达到123.5±1.20mg/g，相对酶活达到2050±20U/g。将其添加到新鲜的米糠中，在米糠含水量24％、磁性固定化木瓜蛋白酶添加量为0.7g、反应时间100min、温度50℃时，脂肪酶酶活力最低(以吸光度记)，吸光度达到0.89，可以有效的钝化米糠中的脂肪酶，避免了底物被酶解。磁性固定化木瓜蛋白酶在重复使用5次后次酶活为78％，其与底物的分离率达到100％，解决了传统游离蛋白酶酶稳定米糠不可重复利用的问题。

主权项

1.一种磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法，本发明为了解决现有酶法稳定米糠时酶的重复利用率低、生产成本高等问题，而提出了一种磁性固定化木瓜蛋白酶稳定米糠的方法，本发明以FeCl3和FeSO4制备磁性Fe3O4纳米粒子，利用Fe3O4纳米粒子和SiOx复合，从而得到Fe3O4/SiOx复合粒子，利用APTS化学改性法修饰Fe3O4/SiOx复合粒子，即引入多官能团，改性后得到Fe3O4/SiOx‑g‑P(GMA)载体，将木瓜蛋白酶进行固定化，再将其加入米糠中，其主要影响因素为磁性固定化木瓜蛋白酶稳定米糠过程中米糠的含水量、磁性固定化木瓜蛋白酶添加量、酶解时间及酶解温度；其特征在于，利用磁性固定化木瓜蛋白酶稳定米糠的方法通过以下步骤实现：步骤一、加工前处理：以FeCl3和FeSO4制备磁性Fe3O4纳米粒子备用，然后将木瓜蛋白酶进行磁性固定化，测量其载酶量及酶活；称取200.0g新鲜米糠，将其进行粉碎过100目筛；步骤二、酶法稳定：加水调节米糠含水量为12％‑24％，调节磁性复合载体固定化木瓜蛋白酶添加量为0.5‑1.0g，反应时间为30‑90min，反应温度为40‑80℃；步骤三、脂肪水解酶活性测定：取降温至37℃的米糠1g，加入3mL含0.5％曲拉通的0.1mol/L的磷酸缓冲液中，再加入含有硝基苯酚月桂酸的异丙醇溶液，于37℃水浴4h，煮沸5min，6000r/min离心8min，取上清液于410nm测吸光度；步骤四、将使用后的磁性固定化木瓜蛋白酶重复使用，反应完成后，将磁性固定化木瓜蛋白酶与底物分离，测定其酶活力以及计算其分离率。