[发明专利]一种磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法

权利要求书

1.一种磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法，本发明为了解决现有酶法稳定米糠时酶的重复利用率低、生产成本高等问题，而提出了一种磁性固定化木瓜蛋白酶稳定米糠的方法，本发明以FeCl₃和FeSO₄制备磁性Fe₃O₄纳米粒子，利用Fe₃O₄纳米粒子和SiOx复合，从而得到Fe₃O₄/SiOx复合粒子，利用APTS化学改性法修饰Fe₃O_4/SiOx复合粒子，即引入多官能团，改性后得到Fe₃O₄/SiOx-g-P(GMA)载体，将木瓜蛋白酶进行固定化，再将其加入米糠中，其主要影响因素为磁性固定化木瓜蛋白酶稳定米糠过程中米糠的含水量、磁性固定化木瓜蛋白酶添加量、酶解时间及酶解温度；其特征在于，利用磁性固定化木瓜蛋白酶稳定米糠的方法通过以下步骤实现：步骤一、加工前处理：以FeCl₃和FeSO₄制备磁性Fe₃O₄纳米粒子备用，然后将木瓜蛋白酶进行磁性固定化，测量其载酶量及酶活；称取200.0g新鲜米糠，将其进行粉碎过100目筛；步骤二、酶法稳定：加水调节米糠含水量为12％-24％，调节磁性复合载体固定化木瓜蛋白酶添加量为0.5-1.0g，反应时间为30-90min，反应温度为40-80℃；步骤三、脂肪水解酶活性测定：取降温至37℃的米糠1g，加入3mL含0.5％曲拉通的0.1mol/L的磷酸缓冲液中，再加入含有硝基苯酚月桂酸的异丙醇溶液，于37℃水浴4h，煮沸5min，6000r/min离心8min，取上清液于410nm测吸光度；步骤四、将使用后的磁性固定化木瓜蛋白酶重复使用，反应完成后，将磁性固定化木瓜蛋白酶与底物分离，测定其酶活力以及计算其分离率。

2.根据权利要求1所述的一种磁性固定化酶新鲜稳定米糠的方法，其特征在于步骤二中将米糠的含水量调节到12％-24％。

3.根据权利要求1所述的一种磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法，其特征在于步骤二中将磁性复合载体固定化木瓜蛋白酶添加量为0.5g-1.0g。

4.根据权利要求1所述的一种磁性固定化酶稳定新鲜米糠的方法，其特征在于步骤二中将反应时间调节为30min-90min。

5.根据权利要求1所述的一种磁性固定化酶法稳定新鲜米糠的方法，其特征在于步骤二中将反应温度调节到40℃-80℃。