[发明专利]一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法有效
| 申请号： | 201811140628.6 | 申请日： | 2018-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN109206507B | 公开（公告）日： | 2021-03-23 |
| 发明（设计）人： | 孟春英;张小军;李停停;梅光明 | 申请（专利权）人： | 浙江省海洋水产研究所 |
| 主分类号： | C07K14/825 | 分类号： | C07K14/825;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/04 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 316021 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及金属硫蛋白提取技术领域，公开了一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法。通过氯化锌诱导、多次离心提取、用填料为聚甲基丙烯酸酯的分子筛预装柱一次纯化及阴离子交换层析二次纯化的方法从虾夷扇贝内脏中提取金属硫蛋白。通过本发明的从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法所获得的两种亚型的混合物及两种亚型的单品的纯度高。并且，该方法的提取过程简单，且选用虾夷扇贝内脏为原料进行金属硫蛋白的提取，充分利用企业加工的下脚料，提高了虾夷扇贝的经济价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 扇贝 同时 提取 两种亚型 金属 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）诱导：将活的虾夷扇贝暴露在氯化锌溶液中诱导；（2）提取：取诱导后的虾夷扇贝的内脏，匀浆，离心提取，得到金属硫蛋白粗提物；（3）一次纯化：将金属硫蛋白粗提物复溶，离心，用滤膜过滤，然后，进行柱色谱分离，收集洗脱液，将洗脱液冷冻干燥，获得虾夷扇贝内脏源两种亚型金属硫蛋白的混合物；（4）二次纯化：取两种亚型金属硫蛋白的混合物复溶，用滤膜过滤，然后，进行阴离子交换层析分离，以NaCl溶液为流动相，收集洗脱液，用巯基试剂进行点滴检测，当巯基试剂显色时，将洗脱液进行脱盐处理，再次收集脱盐后的洗脱液，真空冷冻干燥即可得到两种亚型金属硫蛋白。
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- 2009-10-24 - 2010-04-21 - C07K14/825
- 本发明的从家蝇幼虫中诱导并提取金属硫蛋白的方法，利用Cd2+，Zn2+，Cu2+的金属离子生物诱导剂的培养基，在非金属培养器皿中培养3-5日龄家蝇幼虫，将家蝇幼虫漂洗、灭菌、低温高速均浆，膜过滤、色谱分离、洗脱浓缩，真空冷冻干燥，能够获得分子量5300-6500dDa含有20-27％半胱氨酸的Zn\Cu金属硫蛋白及其亚型，分子结构中带有少量芳香族氨基酸。经过生物诱导后的幼虫蛋白中金属硫蛋白得率能到达1mg/g，本发明的生产方法成本低、纯度高、产量高。
- 一种快速诱导提取猪肝金属硫蛋白的方法-200910062168.4
- 李丽立;张彬 - 中国科学院亚热带农业生态研究所
- 2009-05-19 - 2009-11-25 - C07K14/825
- 本发明公开了一种快速诱导猪肝金属硫蛋白的方法，其步骤是：①诱导：用锌添加剂的饲料饲喂小猪，再用ZnSO4溶液采用腹腔注射法，进行剂量递增的诱导；②检测：诱导完后屠宰，将所取新鲜肝脏样品直接按巯基显色法对金属硫蛋白的含量进行检测；③粗提：将检测合格的新鲜猪肝脏捣碎，搅拌匀浆，倒入烧杯，再加入乙醇-氯仿混合溶液，低温离心，放人水浴锅内水浴，取出后冷却至室温，离心后的上清液即为金属硫蛋白粗提液；④纯化：将粗提液经超滤浓缩，得浓缩液，在浓缩液中加入乙醇放置过夜，取沉淀离心，沉淀，对滤液层析，洗脱，收集，冷冻干燥，得冻干粉。本发明成本低，效果好，产量高，诱导剂来源广，MT自制纯品，含量为95％以上。
- 鲟鱼肝金属硫蛋白的诱导提取纯方法-200910061460.4
- 兰泽桥;曹玉广;钱名全;刘艾平;李义勇 - 湖北天峡鲟业有限公司
- 2009-04-07 - 2009-09-09 - C07K14/825
- 本发明属于生物制药领域，具体涉及一种以鲟鱼肝为主要原料制备金属硫蛋白的方法，主要步骤是：采用人工饲养的鲟鱼，投喂添加诱导剂乙酸锌的饲料，宰杀取其肝脏；用肝匀浆缓冲液匀浆离心，葡聚糖和亚氨基二乙酸混合物层析柱层析，收集层析液，再真空冷冻干燥得到金属硫蛋白。鲟肝中富含金属硫蛋白，为其它动物肝含量的100倍左右，采用本发明提取金属硫蛋白可降低成本30％，提升收率40％，提高品质，其纯度达99％以上。金属硫蛋白价格昂贵、生理功能显著、用途广泛，利用鲟鱼肝提取金属硫蛋白，其市场前景广阔。
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