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[发明专利]两种厚壳贻贝金属硫蛋白及其编码基因在海域重金属污染监测中的应用-CN202210588934.6有效
发明人：祁鹏志;朱莉;严小军;郭宝英 -专利权人：浙江海洋大学
申请日： 2022-05-26 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明提供了两种厚壳贻贝金属硫蛋白及其编码基因及其在监测海域重金属污染中的应用，属于功能基因技术领域。本发明鉴定得到厚壳贻贝金属硫蛋白基因McMT‑10和McMT‑20。以这两种基因序列为模板设计了两对高特异性荧光定量PCR引物用以检测其在重金属污染环境中的表达量变化。结果显示McMT‑10和McMT‑20对重金属污染高度敏感，根据其表达量的变化可以检测低剂量的重金属污染，同时可以反应污染的严重程度。
两种厚壳贻贝金属蛋白及其编码基因海域重金属污染监测中的应用

[发明专利]一种双溶液混合萃取体系及其在鸵鸟肝脏中的应用-CN201911038302.7有效
发明人：任战军;李倩;罗刚;宋胜杰;艾尧天;刘晨苗;吴婕;穆今展;陈佳翎 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2019-10-29 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明提供一种双溶液混合萃取体系及其在鸵鸟肝脏中的应用，该混合萃取体系由质量比为（1.5~1.7）：1的聚合物溶液与盐溶液组成。制备方法包括：分别配制聚合物溶液和盐溶液；然后按照上述质量百分比将配制好的聚合物溶液和盐溶液混合均匀；静置10~12h。采用本发明的双溶液混合萃取体系及其制备方法提取鸵鸟肝脏中金属硫蛋白，每克鸵鸟肝脏可制得8.2‑8.9mg金属硫蛋白，并且所获得的鸵鸟肝脏金属硫蛋白的纯度高达72%‑78.5%。
一种溶液混合萃取体系及其鸵鸟肝脏中的应用

[发明专利]一种含有金属硫蛋白的固定化小球及其制备方法与应用-CN201910281299.5有效
发明人：王伟;薄涛;王俊凯;许静 -专利权人：山西大学
申请日： 2019-04-09 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开了一种含有金属硫蛋白的固定化小球，制备方法为：(1)培养表达金属硫蛋白的菌；(2)将培养液或菌体用PBS缓冲液悬起，反复冻融三次以上，超声破碎得破碎菌液；(3)将破碎菌液、二氧化硅加入到海藻酸钠‑聚乙烯醇水溶液中，得混合液；(4)将混合液滴加到硼酸‑氯化钡水溶液中，4℃固定4h，即得。本发明的含有金属硫蛋白的固定化小球，球体中含有大量细胞碎片、蛋白质等，重金属离子吸附位点多，有利于吸附位点与重金属离子的接触与结合，具有较好的吸附性能，可用于处理含有重金属的废水；具有良好的机械强度，具有良好的重复利用性，且不会造成二次污染；本发明的技术在重金属废水处理中具有重要的应用价值。
一种含有金属蛋白固定小球及其制备方法应用

[发明专利]一种从动物肝脏中高效提取金属硫蛋白的方法-CN202111592087.2在审
发明人：任发政;张炎;杨东;程俞杰;尚晓 -专利权人：中国农业大学;内蒙古草原鑫河食品有限公司
申请日： 2021-12-23 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明提供了一种从动物肝脏中高效提取金属硫蛋白的方法，将动物肝脏切成长条状，放入组织捣碎机中加入缓冲液，捣碎；将捣碎后的液体水浴加热0.5h～2h，离心处理后收集上清液；将得到的上清液与甲醇混合，再加入过氧化氢，水浴加热15min～30min后，离心收集沉淀物；向沉淀物中加入冰乙酸溶液和β‑巯基乙醇溶液，振荡均匀后水浴加热0.5h～2h，离心后收集上清液；将得到的上清液经超滤，收集滤过液，冻干后得到所述金属硫蛋白。本发明方法的得率可达70.72％，纯度可达81.15％，能够快速从动物肝脏中获取金属硫蛋白，产物不仅纯度高、生物活性好，同时提高动物内脏的附加值，带来较好的经济效益。
一种动物肝脏高效提取金属蛋白方法

[发明专利]重组人金属硫蛋白Ⅲα片段纯品的制备方法-CN201810000449.6有效
发明人：冯永良 -专利权人：汇海（苏州）生物技术有限公司
申请日： 2018-01-02 - 公布日： 2022-02-22 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：一种重组人金属硫蛋白Ⅲα片段纯品的制备方法，步骤：制备融合蛋白溶液；制备融合蛋白粗品；制备巯基峰流穿液；制备酶切液；制备含重组人金属硫蛋白IIIα片段的上清液；制备穿透液；对得到的穿透液用超滤膜超滤脱盐，再上样于经缓冲液平衡的阴离子交换层析柱，再由洗脱液进行梯度洗脱，分瓶收集，取巯基峰洗脱液超滤脱盐，冷冻干燥成冻干粉，得到成品。在获得高纯度重组人金属硫蛋白Ⅲα片段的同时，降低制备成本；促进金属硫蛋白空间结构的正确折叠，减少金属硫蛋白活性损失；使得获得的重组人金属硫蛋白IIIa片段具有正确的空间结构及理想的生物活性。
重组金属蛋白片段纯品制备方法

[发明专利]一种金属硫蛋白基因MT27、其编码得到的金属硫蛋白及其表达和应用-CN201910411145.3有效
发明人：李小方 -专利权人：中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心
申请日： 2019-05-16 - 公布日： 2022-02-18 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开了一种金属硫蛋白基因MT27，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示，来源于土壤微生物，该金属硫蛋白基因重金属耐受性好，在1.0M浓度镉溶液中仍然可以存活生长。并且对镉金属富集效应明显，因而在重金属污染治理等行业具有较大的应用潜力。
一种金属蛋白基因 mt27 编码得到及其表达应用

[发明专利]一种金属硫蛋白基因MT18、其编码得到的金属硫蛋白及其表达和应用-CN201910290545.3有效
发明人：李小方 -专利权人：中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心
申请日： 2019-04-11 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开了一种金属硫蛋白基因MT18，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示，来源于土壤微生物，该金属硫蛋白基因重金属耐受性好，在1.0M浓度镉溶液中仍然可以存活生长。并且对镉金属富集效应明显，因而在重金属污染治理等行业具有较大的应用潜力。
一种金属蛋白基因 mt18 编码得到及其表达应用

[发明专利]制造具有氧化还原活性的低金属化金属硫蛋白的方法及含有该金属硫蛋白的医药组合物-CN201410736345.3有效
发明人：司马承帝 -专利权人：司马承帝;韩东尼;郭俊宏
申请日： 2014-12-04 - 公布日： 2021-12-21 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开了制造具有氧化还原活性的低金属化金属硫蛋白的方法、含有该蛋白的医药组合物，以及应用该医药组合物来治疗因为升高的细胞内氧化压力及/或失衡的细胞内氧化还原电位及/或氧化还原依赖型的金属离子失衡所引起的疾病。
制造具有氧化还原活性金属化金属蛋白方法含有医药组合

[实用新型]一种金属硫蛋白用合成装置-CN202120301813.X有效
发明人：曹吾钦;刘少聪 -专利权人：百朗德（广州）生物科技有限公司
申请日： 2021-02-03 - 公布日： 2021-11-30 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本实用新型提供一种金属硫蛋白用合成装置，涉及金属硫蛋白用合成技术领域，包括主体，所述主体的前端设置有隔离门，所述主体的底部固定安装有万向轮，所述主体的底部设置有辅助支撑装置，所述隔离门的表面设置有清理装置，所述辅助支撑装置包括安装板，所述安装板固定安装在主体的一侧，所述安装板的一侧固定安装有支撑板，所述支撑板的顶部固定安装有电机，所述支撑板的底部转动连接有螺纹杆。本实用新型中，通过设置支撑装置，在实施中，支撑壳可以对主体进行支撑，并且支撑壳可以帮助万向轮分担主体的重力，防止了万向轮在长期支撑主体时，出现内部零件损坏的情况，防止了在下一次移动主体时，万向轮不能使用的情况。
一种金属蛋白合成装置

[发明专利]一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法-CN201910456873.6有效
发明人：梅光明;严国;张小军;陈思;孟春英 -专利权人：浙江省海洋水产研究所
申请日： 2019-05-29 - 公布日： 2021-06-22 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明涉及金属硫蛋白提取技术领域，为解决有金属硫蛋白提取工艺存在的提取对象要求苛刻、提取周期长、成本高、纯度低的问题，提供了一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，包括以下步骤：(1)将口虾蛄去壳，取可食部分，匀浆，离心提取冷冻干燥；(2)进行凝胶过滤层析；(3)进行阴离子交换层析；(4)进行脱盐处理，得第一亚型金属硫蛋白和第二亚型金属硫蛋白。本发明以口虾蛄可食部分为原料，针对口虾蛄自身特有的基质特点设计高纯度金属硫蛋白的提取工艺，该工艺提取周期短，提取量大，且成本低，纯度高，适合工厂化、规模化生产。
一种口虾蛄中提取纯度金属蛋白方法

[发明专利]一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法-CN201910550131.X有效
发明人：张小军;李梦龙;梅光明;孟春英 -专利权人：中国水产科学研究院;浙江省海洋水产研究所
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开了一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，包括以下步骤：(1)诱导；(2)粗提；(3)凝胶过滤柱层析初步纯化；(4)DEAE阴离子交换层析分离毛蚶MT‑II、毛蚶MT‑I；(5)脱盐。本发明以毛蚶为原料，开发设计了一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，原料来源广泛，制备工艺简单，操作简便，高效快速，提取率与MT纯度高，能降低工业生产成本，适合工厂化、规模化生产。
一种毛蚶提取金属蛋白方法

[发明专利]一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法-CN201811140628.6有效
发明人：孟春英;张小军;李停停;梅光明 -专利权人：浙江省海洋水产研究所
申请日： 2018-09-28 - 公布日： 2021-03-23 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明涉及金属硫蛋白提取技术领域，公开了一种从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法。通过氯化锌诱导、多次离心提取、用填料为聚甲基丙烯酸酯的分子筛预装柱一次纯化及阴离子交换层析二次纯化的方法从虾夷扇贝内脏中提取金属硫蛋白。通过本发明的从虾夷扇贝中同时提取两种亚型金属硫蛋白的方法所获得的两种亚型的混合物及两种亚型的单品的纯度高。并且，该方法的提取过程简单，且选用虾夷扇贝内脏为原料进行金属硫蛋白的提取，充分利用企业加工的下脚料，提高了虾夷扇贝的经济价值。
一种扇贝同时提取两种亚型金属蛋白方法

[发明专利]重组人金属硫蛋白Ⅲ纯品的制备方法-CN201911186142.0在审
发明人：胡小垒;原海亮;秦建新;冯永良 -专利权人：苏州华研医用科技有限公司
申请日： 2019-11-28 - 公布日： 2020-01-31 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：一种重组人金属硫蛋白Ⅲ纯品的制备方法，属于基因工程重组蛋白质纯化技术领域。步骤：制备融合蛋白溶液；制备上清液Ⅱ；制备酶切液；制备MT‑III蛋白的粗品液；制备含MT‑III蛋白的半成品溶液；收集巯基峰洗脱液；将巯基峰洗脱液进行超滤除盐，然后冷冻干燥成冻干粉，得到重组人金属硫蛋白Ⅲ纯品。优点：在获得高纯度重组人金属硫蛋白Ⅲ的同时，避免使用昂贵的GST亲和层析介质，降低制备成本；既可促进金属硫蛋白空间结构的正确折叠，防止金属硫蛋白片段聚合析出；使得获得的重组人金属硫蛋白III纯度及稳定性更好。
制备重组人金属硫蛋白金属硫蛋白峰洗脱液巯基空间结构蛋白蛋白质纯化技术基因工程重组制备融合蛋白半成品溶液析出冻干粉高纯度上清液折叠超滤除盐粗品酶切聚合

[发明专利]一种牡蛎中锌金属硫蛋白锌的提取方法-CN201910660927.0在审
发明人：肖志勇;方丽金;郑秋芳;吴苏喜 -专利权人：福建福瑞康信息技术有限公司
申请日： 2019-07-22 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开的一种牡蛎中锌金属硫蛋白的提取方法，包括以下步骤：取新鲜牡蛎，于冰盐水中浸泡24‑48h，剥壳取牡蛎肉，并剪切至直径为1‑3cm的碎片；加入组织裂解液、二硫苏糖醇，经玻璃匀浆器匀浆10‑20min得到匀浆液；加入脂肪水解酶、纤维素酶、多糖水解酶与匀浆液中，过滤；80℃水浴加热酶解混合物，过滤，在滤液中加入植酸调节pH至3.5‑4.5，得到植酸锌沉淀，再调节pH至1，过滤去除植酸镉，得金属硫蛋白溶液；利用分子筛凝胶层析法分离金属硫蛋白；取植酸锌沉淀，调整pH至8‑10，过滤，将所得滤液与所得金属硫蛋白混合，加热至50‑70℃，搅拌反应得锌金属硫蛋白，利用不同状态生物锌，得到锌金属硫蛋白螯合物，无重金属残留，纯度高、杂蛋白少、锌利用率高、提取率高。
锌金属硫蛋白过滤金属硫蛋白匀浆液植酸锌植酸沉淀玻璃匀浆器多糖水解酶二硫苏糖醇分子筛凝胶酶解混合物脂肪水解酶重金属残留组织裂解液分离金属搅拌反应水浴加热水中浸泡纤维素酶锌利用率新鲜牡蛎剪切牡蛎层析法硫蛋白牡蛎肉生物锌杂蛋白螯合物剥壳冰盐去除匀浆加热

[发明专利]一种海洋生物源高效重金属脱除剂贝类金属硫蛋白的诱导、提取分离工艺-CN201510273034.2有效
发明人：孙继鹏;阎光宇;李诗逸;易瑞灶;杨婷 -专利权人：国家海洋局第三海洋研究所
申请日： 2015-05-26 - 公布日： 2019-03-05 - 主分类号： C07K14/825 文献下载
摘要：本发明公开了一种海洋生物源高效重金属脱除剂贝类金属硫蛋白的诱导、提取分离工艺，步骤为：（1）选取双壳贝类在清洁海水中暂养2~7天，剔除死亡贝类；（2）之后进行定向诱导；（3）开壳取肉，按比例加入缓冲溶液，提取液经加热处理去除杂蛋白；（4）提取液冷却后经筛网过滤去除沉淀物，上清液通过多级超滤、微滤、纳滤多元膜集成纯化系统脱除大分子、分离提纯及浓缩，获得MT粗品；（5）MT粗品经葡聚糖凝胶与离子交换层析联合分离纯化，后经干燥处理，获得高纯度海洋生物源MT产品。如此可以有效提高贝类体内的金属硫蛋白含量，并可以获得对重金属具有高效脱除作用，更为安全的海洋生物源高效重金属解毒剂产品。
一种海洋生物高效重金属脱除贝类金属蛋白诱导提取分离工艺

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