[发明专利]一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法

摘要

本发明涉及一种利用拟无枝菌酸菌发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，其特点是通过发酵培养保藏登记号为CCTCC NO：M 2017189的一株拟无枝菌酸菌株（Amycolatopsis speibonae）YIM PH20520，再对其发酵产物进行萃取浓缩及分离纯化，得到分子量为223，分子式为C10H9NO5的棘孢菌素以及分子量为207，分子式为C10H9NO4的7‑去氧棘孢菌素，本发明为棘孢菌素类抗生素的生产制备提供了新方法、新途径。

主权项

1.一种发酵制备棘孢菌素类抗生素的方法，其特征是该方法包括如下步骤 :(1) 生产菌株为Amycolatopsis speibonae YIM PH20520，其保藏号为CCTCC NO ：M 2017189 ；(2) 菌种液体种子培养 ：①液体种子培养基的制备 :取酵母膏4.0g、葡萄糖4.0g、麦芽膏5.0g、复合维生素3.5 mg、加水至1000ml，pH 7.2，120°C灭菌30min ；②发酵 :将菌株YIM PH20520接种到灭菌后的培养基中，28°C下于转速为220转／分钟的摇床上摇瓶发酵3天 ；(3) 菌种发酵培养 ：①发酵培养基的制备 :取淀粉20.0~30.0g、牛肉膏1.0~5.0g、葡萄糖0.5~1.5g、酵母膏3.0~7.0g、蛋白胨1.0~5.0g、CaCO3 2.0~6.0g、加水至1000ml，pH 7.0，120°C灭菌30min ；②发酵 ：将上述方法(1)中得到的菌株YIM PH20520种子液加到灭菌后的发酵培养基中，加菌种量为发酵培养基重量的10 %，28°C下于转速为190~250转／分钟的摇床上摇瓶发酵5~7天 ；(4) 发酵液处理 ：①发酵液经3000转／分钟离心，离心时间为20分钟 ；②以等体积乙酸乙酯萃取发酵上清液4次，回收溶剂后得到菌株发酵粗提物 ；③进行硅胶柱层析，以三氯甲烷‑甲醇体积比80 ：1至9 ：1梯度洗脱，得到Fr.1‑Fr.5五个组分 ；④组分Fr.5经甲醇凝胶柱层析纯化得到单体化合物1，即为棘孢菌素 ；⑤组分Fr.3经甲醇凝胶柱层析纯化后，采用乙腈‑水体积比55 ：45为流动相，用制备型HPLC制备得到单体化合物2，即为7‑去氧棘孢菌素 。