[发明专利]一种单细胞全基因组扩增试剂盒

摘要

本发明提供一种更佳的适用于单细胞全基因组扩增的试剂盒，一方面旨在通过优化引物和扩增步骤，可有效应用于固定后的单细胞样本；同时将一种可以特异性切除尿嘧啶核苷酸的酶处理应用于单细胞样品扩增中，可以显著降低扩增的错误率。相对于现有技术，该试剂盒更高效、简单、实用、精准、损失少、成本低、方法重复性好、错误率低、非常适合固定样本的单细胞全基因组扩增试剂盒，拓展了样本应用范围，同时降低了错误率，提高了检测的精密度。 1

主权项

1.一种单细胞全基因组扩增试剂盒，所述试剂盒包括：细胞裂解液、细胞裂解酶、磁珠、校正酶、反应终止液、预扩增缓冲液、终扩增缓冲液。

2.如权利要求1所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解液包括但不限于以下任一种：50mM KAc、20mM Tris‑Ac、10mM MgAc、0.2％Trition X‑100；1xPBS、1xThermo polbuffer、30mM Tris‑HCl；10mM Tris‑HCl、25mM EDTA、100mM NaCl；0.5％SDS、10mM Tris‑HCl、50mM KCl；10mM Tris‑HCl、100mM EDTA、0.5％SDS；30mM Tris‑HCl、10mM EDTA、1％SDS；30mM Tris‑HCl、2mM KCl、0.2％Triton X‑100。

3.如权利要求1所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述校正酶为具有DNA糖基化酶活性的酶。

4.如权利要求1所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述校正酶包括但不限于以下一种或几种：UDG酶、核酸外切酶Ⅷ、单链选择性尿嘧啶‑DNA糖基化酶、TU错配DNA糖基化酶、具有甲基结合域的尿嘧啶‑DNA糖基化酶。

5.如权利要求1所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述反应终止液包括：尿嘧啶‑糖基化酶抑制剂。

6.如权利要求1所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述预扩增缓冲液包括DNA聚合酶、BSA、dNTP、DNA聚合酶、无核酸水、第一随机引物。

7.如权利要求6所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述第一随机引物结构为：第一引物固定序列‑第一引物随机序列‑第一引物三联重复序列，其中所述第一引物固定序列如SEQ ID NO：1所示，具体为ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTAC。

8.如权利要求7所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述第一引物随机序列长度为4～20nt，优选地为4～10nt，更优选地为6～8nt。

9.如权利要求1所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述终扩增缓冲液包括DNA聚合酶、BSA、dNTP、DNA聚合酶、无核酸水、第二随机引物。

10.如权利要求9所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述第二随机引物结构为：第二引物固定序列‑第二引物随机序列‑第二引物三联重复序列，其中所述第二引物固定序列如SEQ ID NO：2所示，具为:ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTAC。

11.如权利要求10所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述第二引物随机序列长度为4～20nt，优选地为4～10nt，更优选地为6～8nt。

12.如权利要求7或10所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述第一引物中的三联重复序列为TTT，则所述第二引物中的三联重复序列GGG；所述第一引物中的三联重复序列为AAA，则所述第二引物中的三联重复序列

GGG；所述第一引物中的三联重复序列为TTT，则所述第二引物中的三联重复序列CCC；所述第一引物中的三联重复序列为AAA，则所述第二引物中的三联重复序列CCC。

13.如权利要求6或9所述的一种单细胞全基因组扩增试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶包括但不限于以下一种或几种：vent DNA聚合酶、T7 DNA聚合酶、Bsu DNA聚合酶，大片段、T4 DNA聚合酶、DNA聚合酶I、(Klenow)大片段、DNA聚合酶I(E.coli)、Therminator^TMDNA聚合酶、Sulfolobus DNA聚合酶IV、phi29 DNA聚合酶、Bst2.0DNA聚合酶、Bst 2.0 DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶，全长、Bst DNA聚合酶、Deep VentR^TMDNA聚合酶、VentR(exo–)DNA聚合酶、DNA聚合酶、热启动Taq DNA聚合酶、热启动Taq DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、热启动Taq DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶大片段、Taq DNA聚合酶(提供不含镁离子的ThermoPol II缓冲液)、Taq DNA聚合酶(提供缓冲液)、热启动DNA聚合酶、DNA聚合酶、热启动Flex DNA聚合酶、超保真DNA聚合酶、热启动超保真DNA聚合酶、

下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。 免登录下载普通用户下载升级VIP会员，免费下载

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海美吉生物医药科技有限公司，未经上海美吉生物医药科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】

本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201711405983.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。