[发明专利]一种两离子淀粉基干细胞扩增水凝胶的制备方法及干细胞扩增和收集方法

摘要

本发明一种两离子淀粉基干细胞扩增水凝胶的制备方法及干细胞扩增和收集方法；水凝胶由甲基丙烯酸酯改性两离子淀粉和双端巯基改性聚乙二醇通过巯基‑烯点击手段形成，并在制备过程中引入CGRGDS多肽，提高水凝胶对细胞的亲和能力。该水凝胶可通过聚合物的含量使其力学强度控制在27.21‑69.92kPa.更为重要的是，其能够有效降低细胞扩增过程中非特异性蛋白的粘附。具有良好的生物相容性，能够支持棕色脂肪干细胞的增殖，并在增殖过程中保持其干细胞特性。可为组织工程和细胞治疗策略提供坚实的技术支持。本发明通过“点击”化学获得，免除有机溶剂的参与，环境友好，减少了由于合成过程而造成的支架生物相容性降低的缺点。

主权项

一种两离子淀粉基干细胞扩增水凝胶的制备方法；其特征是步骤如下：(1)将淀粉置于去离子水中，形成淀粉悬浮液；将等体积的氢氧化钠溶液滴加到淀粉悬浮液中，将混合物升温至30‑40℃反应，得到碱化淀粉溶液；(2)将二甲基(氯丙基)铵丙磺酸盐溶于去离子水中，滴加到步骤(1)的碱化淀粉溶液中，并加热至50‑80℃，4‑7小时后，冷却至室温，用冰乙酸中和至中性；然后向体系中加入与反应体系等体积的去离子水；并将此溶液滴加到甲醇中进行沉析，而后离心，并用甲醇洗；室温真空干燥后，得到两离子淀粉；(3)将步骤(2)获得的两离子淀粉溶于二甲基亚砜中，同时将氯化钠加入其中，在130℃下充分溶解，并持续搅拌直至溶液冷却至50℃；在氮气保护下加入4‑二甲氨基吡啶，继续搅拌30‑60分钟后，加入甲基丙烯酸缩水甘油酯，反应12‑36小时；将反应混合液倒入甲醇中析出棕褐色粉末状固体，抽滤，再将粗产物用甲醇洗涤后真空干燥，得到纯净的甲基丙烯酸酯改性的两离子淀粉；(4)将甲基丙烯酸酯改性两性离子淀粉溶解于磷酸盐缓冲溶液中，并在其中加入半胱氨酸‑甘氨酸‑精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸‑丝氨酸多肽，反应10‑30分钟；(5)再将双端巯基改性聚乙二醇溶解于磷酸盐缓冲溶液中，形成浓度为0.1‑40％的溶液；(6)将等体积的步骤(4)和步骤(5)制备的溶液混合，置于37℃下凝胶化，最终得到两性离子淀粉/聚乙二醇/精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸多肽两离子淀粉基干细胞扩增水凝胶。