[发明专利]一种原位杂交探针的制备方法有效
| 申请号： | 201711000583.8 | 申请日： | 2017-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN107603971B | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 蒋晓群 | 申请（专利权）人： | 厦门龙进生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 35218 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 | 代理人： | 姜成康 |
| 地址： | 361000 福建省厦门市海沧区翁角西*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种原位杂交探针的制备方法。方法为，将目标DNA片段化，回收150‑600bp的片段，经过酶修饰处理，与含有限制性内切酶位点序列的DNA衔接子间隔连接成DNA大环和长链；A或B进行大量DNA的获得和标记：A等温扩增，扩增时加入带有标记物的单核苷酸底物，得到带有标记物的DNA产物；或B等温扩增，所得产物以缺口平移法或随机引物法掺入带有标记物的单核苷酸底物，得到带有标记物的DNA产物；对所得带有标记物的DNA产物用对应的限制性内切酶进行消化，即得到长度为150‑600bp的原位杂交探针。本发明所述方法准确地控制了探针的长度范围，降低了生产成本，提高了产品质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 原位杂交 探针 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种原位杂交探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，/n目标DNA的片段化和选择性回收：将目标DNA片段化，选择性回收150-600bp的小片段；/n酶修饰处理：对150-600bp的小片段的两端进行酶修饰处理，使两端成平末端、5'端加磷酸和3'端加dA；/n连接成大环和长链：将上述处理后的小片段与含有限制性内切酶位点序列的DNA衔接子间隔连接成DNA大环和长链；所述含有限制性内切酶位点序列的DNA衔接子的5'端加了磷酸和3'端加了dT；/n大量DNA的获得和标记：/nA，等温扩增，扩增时掺入带有标记物的单核苷酸底物，得到带有标记物的DNA产物；/n或B，等温扩增，所得扩增产物以缺口平移法或随机引物法掺入带有标记物的单核苷酸底物，得到带有标记物的DNA产物；/n酶切：采用与上述DNA衔接子上碱基序列对应的DNA限制性内切酶消化带有标记物的DNA产物，酶切产物长度范围150-600bp；/n得到探针：/n若所述带有标记物的DNA产物中的标记物为直接标记物，则所得到的酶切产物即为原位杂交探针；/n若所述带有标记物的DNA产物中的标记物为间接标记物，则所得到的酶切产物经过与具有反应活性的直接标记物进行偶联，从而得到原位杂交探针。/n
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- 本发明涉及高通量DNA测序技术领域，具体涉及一种适用于纳米孔测序的真菌高纯度长片段基因组DNA提取方法。本发明提供一种真菌长片段基因组DNA的提取方法，采用裂解液对真菌细胞进行裂解，依次加入RNA酶和蛋白酶进行消化处理后，采用离子交换柱吸附基因组DNA，经磁珠纯化得到基因组DNA。该方法提取得到的真菌基因组DNA的得率高、纯度高，片段长度长，可以满足纳米孔测序技术对于基因组DNA的质量要求，还具有成本低廉、操作步骤简单、提取耗时短等优势，适用于大量真菌样本的基因组测序。
- 检测急性早幼粒细胞白血病相关融合基因的试剂盒-201511020840.5
- 王秀莉;刘伟;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 - 安诺优达基因科技(北京)有限公司;浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达(义乌)医学检验有限公司
- 2015-12-30 - 2020-01-10 - C12N15/10
- 本发明涉及检测急性早幼粒细胞白血病相关融合基因的试剂盒。具体而言，提供一种基于二代测序技术的、可同时检测急性早幼粒细胞白血病(APL)相关的多种RARα融合基因的检测试剂盒、基因检测方法，以及用于上述检测方法的二代测序DNA文库的构建方法、建库试剂盒。本发明的检测试剂盒包含用于构建二代测序DNA文库的试剂，以及用于对二代测序DNA文库进行上机测序的试剂。
- 分子条码化-201880034111.0
- R·雷伯弗斯基;J·阿格雷丝迪 - 生物辐射实验室股份有限公司
- 2018-05-21 - 2020-01-10 - C12N15/10
- 提供了用于制备和使用带独特标签的靶核酸分子的方法和组合物。
- 一种体态类生物检材中游离DNA的提取方法-201810693666.8
- 郝晓明;苟春宝;黄卫东;魏良华;李祖田;张郑;罗川;孙进广;王丹华 - 重庆市公安局巴南区分局
- 2018-06-29 - 2020-01-07 - C12N15/10
- 本发明提供了一种体态类生物检材中游离DNA的提取方法，包括生物检材前处理、核酸吸附和洗涤步骤，能够实现对已发生DNA降解的陈旧生物检材而导致采用Chelex‑100 法检验失败的DNA模板进行游离DNA的提取，不仅可以有效提高DNA检验成功率，而且可以减少从头开始复检的繁琐；特别是对生物检材量少，无法复检的案件检材，可以作为有效的补救措施，对于充分发挥游离DNA在案件侦破、打击犯罪、固定证据中强有力的技术支撑作用具有重要意义。
- 一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法-201911018346.3
- 张理博;鞠福龙;罗淑年;王雪;杨光;夏雷;赵平;刘园园 - 九三集团哈尔滨惠康食品有限公司;黑龙江省质量监督检测研究院
- 2019-10-24 - 2020-01-07 - C12N15/10
- 一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，属于植物油脂的转基因成分检测技术领域。所述方法步骤如下：向Eppendorf管加入250μL正己烷和250μL DNA裂解液，再加入500μL转基因食用油脂，混合后裂解；加入0.5mL预冷的三氯甲烷和异戊醇的混合液，混合后，冷冻离心，上清液收集到一个Eppendorf管中；重复上述步骤；向装有上清液的Eppendorf管中加预冷的异丙醇，放置沉淀；沉淀后冷冻离心，弃去上清液，再加入乙醇进行洗涤，冷冻离心，弃去上清液，沉淀物烘干，每10min观察一次直至完全晾干；加入TE缓冲液，充分溶解DNA，保存备用。本发明解决了植物油中DNA模板难提取的问题，此操作方法简便，快捷，灵敏度高，可适用于大部分植物油中DNA的提取，提取时间短，且纯度较高。
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