[发明专利]鉴定或辅助鉴定食源性致病菌的GeXP多重PCR方法的成套试剂与应用

摘要

本发明公开了鉴定或辅助鉴定食源性致病菌的GeXP多重PCR方法的成套试剂与应用。本发明公开的成套试剂，由名称分别为引物对A、引物对B、引物对C、引物对D、引物对E、引物对F和引物对G的引物组成，各引物的序列分别为序列表中序列1‑14；食源性致病菌为大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、霍乱弧菌、单核细胞增生性李斯特菌、空肠弯曲杆菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌。实验证明，利用本发明的成套试剂检测食源性细菌，大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、霍乱弧菌、单核细胞增生性李斯特菌、空肠弯曲杆菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的特异性强，灵敏度高，准确率高，可用于检测食源性致病菌。

主权项

鉴定或辅助鉴定食源性致病菌的成套试剂，由名称分别为引物对A、引物对B、引物对C、引物对D、引物对E、引物对F和引物对G的引物组成；所述引物对A由名称分别为A‑F和A‑R的单链DNA组成；所述A‑F是如下a1)至a4)中的任一种单链DNA：a1)序列表中序列1的第19‑43位所示的单链DNA；a2)在a1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；a3)与a1)或a2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；a4)在严格条件下与a1)或a2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述A‑R是如下b1)至b4)中的任一种单链DNA：b1)序列表中序列2的第20‑44位所示的单链DNA；b2)在b1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；b3)与b1)或b2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；b4)在严格条件下与b1)或b2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述引物对B由名称分别为B‑F和B‑R的单链DNA组成；所述B‑F是如下c1)至c4)中的任一种单链DNA：c1)序列表中序列3的第19‑36位所示的单链DNA；c2)在c1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；c3)与c1)或c2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；c4)在严格条件下与c1)或c2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述B‑R是如下d1)至d4)中的任一种单链DNA：d1)序列表中序列4的第20‑39位所示的单链DNA；d2)在d1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；d3)与d1)或d2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；d4)在严格条件下与d1)或d2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述引物对C由名称分别为C‑F和C‑R的单链DNA组成；所述C‑F是如下e1)至e4)中的任一种单链DNA：e1)序列表中序列5的第19‑37位所示的单链DNA；e2)在e1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；e3)与e1)或e2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；e4)在严格条件下与e1)或e2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述C‑R是如下f1)至f4)中的任一种单链DNA：f1)序列表中序列6的第20‑36位所示的单链DNA；f2)在f1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；f3)与f1)或f2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；f4)在严格条件下与f1)或f2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述引物对D由名称分别为D‑F和D‑R的单链DNA组成；所述D‑F是如下g1)至g4)中的任一种单链DNA：g1)序列表中序列7的第19‑39位所示的单链DNA；g2)在g1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；g3)与g1)或g2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；g4)在严格条件下与g1)或g2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述D‑R是如下h1)至h4)中的任一种单链DNA：h1)序列表中序列8的第20‑40位所示的单链DNA；h2)在h1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；h3)与h1)或h2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；h4)在严格条件下与h1)或h2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述引物对E由名称分别为E‑F和E‑R的单链DNA组成；所述E‑F是如下i1)至i4)中的任一种单链DNA：i1)序列表中序列9的第19‑37位所示的单链DNA；i2)在i1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；i3)与i1)或i2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；i4)在严格条件下与i1)或i2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述E‑R是如下j1)至j4)中的任一种单链DNA：j1)序列表中序列10的第20‑40位所示的单链DNA；j2)在j1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；j3)与j1)或j2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；j4)在严格条件下与j1)或j2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述引物对F由名称分别为F‑F和F‑R的单链DNA组成；所述F‑F是如下k1)至k4)中的任一种单链DNA：k1)序列表中序列11的第19‑40位所示的单链DNA；k2)在k1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；k3)与k1)或k2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；k4)在严格条件下与k1)或k2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述F‑R是如下l1)至l4)中的任一种单链DNA：l1)序列表中序列12的第20‑40位所示的单链DNA；l2)在l1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；l3)与l1)或l2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；l4)在严格条件下与l1)或l2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述引物对G由名称分别为G‑F和G‑R的单链DNA组成；所述G‑F是如下m1)至m4)中的任一种单链DNA：m1)序列表中序列13的第19‑37位所示的单链DNA；m2)在m1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；m3)与m1)或m2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；m4)在严格条件下与m1)或m2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述G‑R是如下n1)至n4)中的任一种单链DNA：n1)序列表中序列14的第20‑38位所示的单链DNA；n2)在n1)的5′端和/或3′端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；n3)与n1)或n2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；n4)在严格条件下与n1)或n2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述食源性致病菌为大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、霍乱弧菌、单核细胞增生性李斯特菌、空肠弯曲杆菌、副溶血弧菌和/或金黄色葡萄球菌。