[发明专利]一种突变型Tn5转座酶及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201611196754.4 | 申请日： | 2016-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN106754811B | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 曹林;张力军;聂俊伟;齐心;韩锦雄;瞿志鹏;徐晓昱 | 申请（专利权）人： | 南京诺唯赞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/10;C12N15/70;C40B50/06;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 杜静;徐冬涛 |
| 地址： | 210038 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种突变型Tn5转座酶及其制备方法和应用，对现有EK/LP Tn5转座酶进行降低DNA偏好性的定点突变，所述定点突变是指D97E，D188E、E326D中的至少两个，所述定点突变改进了Tn5转座酶蛋白序列和构象，并配合对反应体系的微调，改进Tn5转座酶对DNA靶序列插入的偏好性，显著改善了DNA建库均一性，并使建库结果具有更好的覆盖度，显著提高建库均一性，适应高通量测序建库的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 建库 定点突变 制备方法和应用 均一性 偏好性 突变型 高通量测序 蛋白序列 覆盖度 构象 微调 改进 配合 | ||
【主权项】：
1.一种突变型Tn5转座酶，其特征在于，所述突变型Tn5转座酶的氨基酸序列为EK/LP Tn5转座酶的氨基酸序列定点突变所得，所述定点突变是指D97E、D188E、E326D中的至少两个；其中，突变位点1：D97E，即EK/LP Tn5转座酶基酸序列中第97位的天冬氨酸突变为谷氨酸；突变位点2：D188E，即EK/LP Tn5转座酶基酸序列中第188位的天冬氨酸突变为谷氨酸；突变位点3：E326D，即EK/LP Tn5转座酶基酸序列中第326位的谷氨酸突变为天冬氨酸；编码所述突变型Tn5转座酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示。
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