[发明专利]一种慢病毒单质粒体内生物素化载体及制备方法有效
| 申请号： | 201610928951.4 | 申请日： | 2016-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN106520835B | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 吴勇延;崔永萍;王斌全;高伟;温树信;张春明;赵沁丽;刘青青;陈波;赵均 | 申请（专利权）人： | 山西医科大学第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66 |
| 代理公司： | 14105 山西五维专利事务所(有限公司) | 代理人： | 郭海燕<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 030001 *** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明属于蛋白表达纯化和干细胞技术研究领域，具体涉及一种慢病毒单质粒体内生物素化载体及制备方法。本发明所述慢病毒单质粒体内生物素化载体包含骨架载体pCDH‑MCS‑T2A‑PURO‑MSCV、FLAG标签、生物素化识别标签AVI、自我剪接肽P2A、HA标签和生物素连接酶BirA基因序列。本发明的体内生物素化载体用于制备生物素化目的蛋白，后续通过链亲和素—生物素亲和纯化研究蛋白——蛋白相互作用或蛋白——核酸相互作用，与传统的免疫沉淀实验方法相比，具有更高的特异性和更强的亲和力，能够获得更加精确的实验结果。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 质粒 体内 生物素 载体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种慢病毒单质粒体内生物素化载体，其特征在于：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，所述慢病毒单质粒体内生物素化载体包含骨架载体pCDH-MCS-T2A-PURO-MSCV、FLAG标签、生物素化识别标签AVI、自我剪接肽P2A、HA标签和生物素连接酶BirA基因序列，所述的骨架载体pCDH-MCS-T2A-PURO-MSCV核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示，所述的Flag标签和生物素化识别标签AVI融合成融合基因Flag-AVI，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。/n
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- 2019-08-09 - 2019-11-26 - C12N15/867
- 本发明公开了外源性人端粒酶反转录酶基因重组慢病毒颗粒的获得方法，具体涉及生物技术领域，包括以下步骤：S1、准备材料和试剂；S2、构建pLVX‑puro‑hTERT重组慢病毒载体；S3、表达hTERT基因重组慢病毒颗粒的获得。本发明通过携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，慢病毒载体能够将目的基因高效整合于宿主基因组，从而实现外源基因长期、稳定的表达，整个慢病毒颗粒获取操作方便，获取的慢病毒颗粒对于后期的感染细胞，使正常体细胞永生化得到保证，可获得稳定增殖的永生化细胞系，并且侵染效率高，稳定性较好。
- 一种肝细胞miR-199b低表达的慢病毒表达载体及其构建方法-201810362418.5
- 刘建军;任晓虎;阮嘉雯;刘威;黄新凤 - 深圳市疾病预防控制中心(深圳市卫生检验中心、深圳市预防医学研究所)
- 2018-04-20 - 2019-11-26 - C12N15/867
- 本发明提供一种肝细胞miR‑199b低表达的慢病毒表达载体，包括pLVX‑shRNA2‑puro病毒载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和tudmiRNA‑199b重组质粒；所述多克隆位点序列包括Hind III酶切位点和BamH I酶切位点，所述tudmiRNA‑199b重组质粒正向插入所述多克隆位点序列中。本发明属于基因工程技术领域，本发明提供的重组慢病毒表达载体具有转染效率高，用量少的优点，可在人源肝细胞中持续、高效、稳定地抑制miRNA‑199b表达。
- 一种人抗CD19嵌合抗原受体修饰的CIK的制备方法及应用-201610933594.0
- 刘明录;万磊;李言志;冯健海;金海峰;强邦明;张传鹏 - 山东兴瑞生物科技有限公司
- 2016-10-25 - 2019-11-22 - C12N15/867
- 本发明公开了一种人抗CD19嵌合抗原受体修饰的CIK的制备方法及应用，编码嵌合抗原受体scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ的融合基因片段，将所述融合基因片段插入慢病毒表达载体，包装成携带scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，该嵌合抗原受体scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ]修饰的CIK可用于B细胞淋巴瘤白血病的治疗。
- 一种基于OCTS技术的胰腺癌、恶性间皮瘤CAR-T治疗载体及其构建方法和应用-201710390649.2
- 祁伟;俞磊;康立清;林高武;余宙 - 上海优卡迪生物医药科技有限公司
- 2017-05-27 - 2019-11-22 - C12N15/867
- 本发明公开了一种基于OCTS技术的胰腺癌、恶性间皮瘤CAR‑T治疗载体，包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子(SEQ ID NO.14)、OCTS嵌合受体结构域和PDL1单链抗体；OCTS嵌合受体结构域包括：CD8 leader嵌合受体信号肽(SEQ ID NO.15)、PDL1单链抗体轻链VL(SEQ ID NO.16)、PDL1单链抗体重链VH(SEQ ID NO.17)、MESOTHELIN单链抗体轻链VL(SEQ ID NO.18)、MESOTHELIN单链抗体重链VH(SEQ ID NO.19)、抗体内铰链Inner‑Linker(SEQ ID NO.20)、单链抗体间铰链Inter‑Linker(SEQ ID NO.21)、CD8 Hinge嵌合受体铰链(SEQ ID NO.22)、CD8Transmembrane嵌合受体跨膜区(SEQ ID NO.23)、TCR嵌合受体T细胞激活域(SEQ ID NO.26)以及嵌合受体共刺激因子区域。此外，本发明还公开了该载体的构建方法及其在制备治疗胰腺癌、恶性间皮瘤的药物中的应用。
- 一种乳腺癌骨转移小鼠模型造模方法-201910829779.0
- 韩倩倩;王白燕;高剑峰;李宁;杨联河;姜乃菡 - 河南中医药大学
- 2019-09-03 - 2019-11-22 - C12N15/867
- 本发明涉及一种乳腺癌骨转移小鼠模型造模方法。该方法包括以下步骤：取小鼠，将用于诱导小鼠乳腺癌的慢病毒制剂对小鼠进行乳头注射，将乳头注射过慢病毒的小鼠以血液注射的形式注射用于诱导小鼠乳腺癌的慢病毒制剂若干次。首先使用用于诱导小鼠乳腺癌的慢病毒制剂对小鼠进行乳头注射，使得小鼠产生原发肿瘤。之后将用于诱导小鼠乳腺癌的慢病毒制剂对小鼠进行血液注射，诱导原发肿瘤细胞向血液中移动，促使其形成骨转移状态。可促使小鼠的原发乳腺癌成功转移至目标位点。
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