[发明专利]一种人凝血酶的制备方法在审
| 申请号： | 201610614283.8 | 申请日： | 2016-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN106011116A | 公开（公告）日： | 2016-10-12 |
| 发明（设计）人： | 徐俊;施炜;夏正祥;王弘远;占德国;周雪峰;程露 | 申请（专利权）人： | 上海莱士血液制品股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/74 | 分类号： | C12N9/74 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所 31219 | 代理人： | 严晨;许亦琳 |
| 地址： | 201401 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及血液制品领域，特别是涉及一种人凝血酶的制备方法。本发明提供一种人凝血酶的制备方法，包括如下步骤：1）将人血浆Cohn级分得到的组分III复溶、病毒灭活，所得料液通过阴离子交换树脂纯化，获得凝血酶原复合物洗脱液；2）在步骤1）所得洗脱液中加入钙离子，孵育至凝血酶原被有效活化；3）将步骤2）所得料液通过阳离子交换树脂进行分离纯化；4）将步骤3）所得料液进行纳米膜过滤，即得所述人凝血酶成品。本发明所提供的制备方法利用本工艺市场的凝血酶制品，不仅活力高、得率高，而且长期稳定性也好，符合临床应用的安全有效的要求，具有较明显的经济价值和现实意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 凝血酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种人凝血酶的制备方法，包括如下步骤：1)将人血浆Cohn级分得到的组分III复溶、病毒灭活，所得料液通过阴离子交换树脂纯化，获得凝血酶原复合物洗脱液；2)在步骤1)所得洗脱液中加入钙离子，孵育至凝血酶原被有效活化；3)将步骤2)所得料液通过阳离子交换树脂进行分离纯化；4)将步骤3)所得料液进行纳米膜过滤，即得所述人凝血酶成品。
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- 本发明公开了一种利用凝胶分子筛去除猪凝血酶中内毒素的方法方法，属于农副产品深加工领域。方法包括离心分离、柱层析、酶的激活和分子筛分离去除内毒素。优点是分离效果好，凝血酶的活性高，凝血酶中热源物质和内毒素少，临床使用安全性高。
- 一种利用猪血制备凝血酶的方法-201010230028.6
- 宋古全;张立娟;朱稀檩;王雅静 - 天津宝迪农业科技股份有限公司
- 2010-07-19 - 2012-02-01 - C12N9/74
- 一种利用猪血制备凝血酶的方法，依照下列步骤进行：(1)向猪血中加入抗凝剂，离心分离，取上层的抗凝血浆；(2)向抗凝血浆中加入1.0mol/L BaCl2溶液，依次进行搅拌、静置、离心，然后弃上清；(3)将步骤(2)中的沉淀依次通过洗涤、离心后，弃上清；(4)将步骤(3)中的沉淀用0.2mol/L EDTA，pH5.3溶解，调pH至5.3，然后静置、离心、弃上清；(5)将步骤(4)中的沉淀用EDTA进行溶解吸附，用Ca2+激活凝血酶原，得凝血酶原溶液，再将凝血酶原溶液的pH调至7.1，室温静置2-3h，过滤即得凝血酶溶液。该方法操作简便，生产周期短，易于工业化生产，制备出的凝血酶纯度高。
- 一种蛇毒类凝血酶蛋白的制备方法-201110241205.5
- 陆一鸣;王俊杰;胡振林;王凯慧;魏玉保;孙树汉 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2011-08-22 - 2011-12-28 - C12N9/74
- 本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种蛇毒类凝血酶蛋白的制备方法，首先分离广西尖吻蝮蛇毒腺组织，构建噬菌体展示文库，以纤维蛋白/纤维蛋白原为底物，经过三轮淘选，获得了一个新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因。本发明还构建了尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因的原核表达载体pET-32(a)-TLE，诱导表达、亲和纯化和分子筛纯化后，获得了具有生物学活性的重组蛇毒类凝血酶蛋白。该酶可用于制备心血管溶栓药物。
- 一种综合利用猪血的方法-201010504765.0
- 吴保承;杨春霞 - 江苏省江大绿康生物工程技术研究有限公司
- 2010-10-13 - 2011-02-23 - C12N9/74
- 本发明属生物活性物质的分离提取技术领域。具体涉及将新鲜猪血经抗凝处理后以血浆和血球为出发底物分别制备凝血酶和猪血水解蛋白的方法。血浆经低温冷冻、沉淀收集凝血酶原、离子激活、酶液纯化等步骤制得高活性的凝血酶；血球经破壁、溶血、复合酶分段酶解、过滤除菌等步骤制得高活性的猪血水解蛋白。该方法制得的猪血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白质的80％以上，易于吸收利用。本发明方法充分利用了原料，一次投料可以生产两种高附加值产品。整个生产过程避免使用毒性大的有机溶剂，克服了产品单一、溶剂残留等缺陷，降低了生产成本。用本发明方法，1L猪血可制得凝血酶精品6000U以上、高活性的猪血水解蛋白粉150g以上。
- 专利分类
