[发明专利]基于王浆主蛋白成分鉴别中蜂蜂蜜与意蜂蜂蜜的方法

摘要

本发明提供一种基于王浆主蛋白成分鉴别中蜂蜂蜜与意蜂蜂蜜的方法，本发明是通过生物学方法，通过中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜在蛋白上的差异，蜂蜜样品在处理后进行蛋白电泳，出现两者的差异性蛋白条带，差异性条带经质谱分析，确定其蛋白种类，以此来鉴别两种不同蜂种来源的蜂蜜，解决市场上存在的中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜难以分辨，以及意蜂蜂蜜冒充和掺入中蜂蜂蜜这一问题，可遏制以低价意蜂蜂蜜冒充高价中蜂蜂蜜的乱象，在中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的鉴别中应用。

主权项

一种基于王浆主蛋白成分鉴别中蜂蜂蜜与意蜂蜂蜜的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)蜂蜜中总蛋白的提取：分别称取中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜，分别放入离心管中，各加无菌水，震荡混匀，离心10分钟，吸取上清液至新的离心管中，将上清液置于4℃冰箱预冷10分钟，加入无水乙醇，在冰水浴中温和搅拌15分钟，然后再次离心10分钟，弃去上清液，沉淀加无菌水，搅拌然后震荡混匀，后分装到离心管中置于‑80℃冰箱备用，来自不同蜂种的蜂蜜用不同标识标记；(2)样品蛋白浓度测定：用蛋白浓度测定试剂盒测定；(3)蛋白样品的处理：分别取中蜂蜂蜜蛋白样品和意蜂蜂蜜蛋白样品于离心管中，各加入蛋白上样缓冲液，震荡混匀后恒温金属浴变性10分钟；(4)聚丙烯酰胺凝胶的制备：采用分离胶浓度为15％，浓缩胶为5％，胶条厚度1.5mm；(5)蜂蜜蛋白样的电泳：采用蛋白电泳分离系统，两种蛋白上样量均为200μg，初始电压为90V，蛋白进入分离胶后改为150V至电泳结束，并加入蛋白Marker以指示蛋白分子量大小；(6)胶条的处理：电泳结束后胶条放入固定液中固定1小时，中间更换一次固定液，固定完成后用考马斯亮蓝R‑250染液染色3小时，然后置于脱色摇床上脱色至条带清晰；(7)差异蛋白条带的识别：记录两种不同来源的蛋白电泳结果，根据标准蛋白Marker指示，找出差异性的蛋白条带；(8)差异蛋白条带的质谱鉴定：将差异性的蛋白条带切胶后进行质谱检测，质谱检测方法为Maldi‑TOF‑TOF，检测完成后进行数据搜索，确定差异性条带的蛋白质组成。