[发明专利]黑蚁中含氮化合物的提取方法及含氮化合物的应用

摘要

本发明公开一种黑蚁中含氮化合物的提取方法及含氮化合物的应用，黑蚁原材料先经二氯甲烷溶剂室温冷浸提取后得到黑蚁滤渣，再将黑蚁滤渣采用质量百分比为60‑80%甲醇溶液室温冷浸提取，提取后的甲醇浓缩液经冷冻干燥处理得甲醇浸膏，然后甲醇浸膏先后经过乙酸乙酯溶液、乙酸乙酯‑甲醇混合溶液洗脱后，得到的馏分经进一步分离纯化最终提取出6个含氮化合物。该方法能够使黑蚁中富含抗菌的含氮化合物较高的富集或尽可能多的被提取出来，同时提取分离得到的含氮化合物具有较好的抗菌活性，可进一步为抗菌新药的研发提供先导化合物。

主权项

黑蚁中含氮化合物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、取黑蚁原材料，清洗干净后放入45‑50℃烘箱中鼓风干燥至恒重，粉碎，得到黑蚁粉末，备用；步骤二、将步骤一得到的黑蚁粉末用其重量5‑10倍的二氯甲烷溶剂室温冷浸，48‑50h后过滤，将黑蚁残渣滤出后再次加入黑蚁残渣重量5‑10倍的二氯甲烷重复提取，过滤，分别收集滤液和滤渣，滤渣经过干燥，得到黑蚁滤渣粉，备用；步骤三、将步骤二得到的黑蚁滤渣粉放置通风处风干，加入质量百分比为60‑80 %的甲醇溶液室温冷浸提取48‑50h后过滤，收集滤液，滤出的黑蚁渣粉再次加入质量百分比为60‑80 %甲醇溶液室温冷浸提取，重复上述操作若干次，合并滤液，减压下除去溶剂后得到黑蚁60‑80 %甲醇浓缩液；然后将浓缩液置于‑10‑20℃冰箱中冷冻至结冰状，取出再放置于冷冻干燥仪中，调至‑40℃下冷冻干燥处理，得到黑蚁的60‑80%甲醇浸膏，甲醇浸膏密封后放置于‑80℃冰箱中，备用；步骤四、将步骤三得到的甲醇浸膏用甲醇溶剂充分溶解后，用硅胶拌样后，利用湿法上柱，进行柱色谱分离；取100‑200目硅胶装入色谱柱中，上样，用7‑10倍柱体积的乙酸乙酯洗脱，收集乙酸乙酯馏分，合并浓缩后得到乙酸乙酯提取浸膏，备用；接着用7‑10倍柱体积的乙酸乙酯‑甲醇混合液进行梯度洗脱，乙酸乙酯‑甲醇洗脱液的梯度比例依次为10:1、8:2、6:4、4:6、2:8、1:10 和0:10，梯度洗脱后，收集得到的乙酸乙酯‑甲醇溶液馏分，合并浓缩后得到乙酸乙酯‑甲醇混合浸膏，备用；取上述黑蚁的乙酸乙酯提取浸膏用乙酸乙酯溶剂充分溶解，加入硅胶充分拌样干燥，进行柱色谱分离，取200‑300目硅胶装入色谱柱中，上样，然后分别用石油醚‑乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱，石油醚‑乙酸乙酯洗脱液的梯度比例依次为10:1、8:2、6:4、4:6、2:8、1:10和0:10，分别收集馏分，TLC检测合并相同馏分，得到不同馏分段共8个组分；取梯度比例为2：8的石油醚‑乙酸乙酯馏分段，进一步通过Sephadex LH‑20凝胶色谱进行纯化制备，收集合并馏分，经过TLC分析，分别得到化合物3和化合物4；取乙酸乙酯‑甲醇混合浸膏，用甲醇溶剂充分溶解并拌样干燥，进行柱色谱分离，取200‑300目硅胶装入色谱柱中，上样，然后用氯仿‑甲醇溶液梯度洗脱，氯仿‑甲醇洗脱液的梯度比例为9:1、7:1、7:3、5:4、4:5、3:7、1:7和1：9，分别收集馏分，TLC检测合并相同馏分，得到不同馏分段共11个组分；梯度比例为9:1的氯仿‑甲醇馏分经分离纯化后在室温下静置有淡黄色粉末析出，即化合物6；梯度比例为7：1的氯仿‑甲醇馏分用液相色谱分离纯化，得到化合物1和化合物2；梯度比例为5：1的氯仿‑甲醇馏分用薄层色谱分离纯化，得到淡黄色油脂状化合物，即化合物5，化合物1‑6的结构式如下：。