[发明专利]含有β-胡萝卜素的微胶囊及脂肪粉

摘要

本发明提供含有β‑胡萝卜素的微胶囊或脂肪粉，所述β‑胡萝卜素由三孢布拉霉突变株发酵所获得，其特征在于：所述三孢布拉霉突变株于2014年8月8日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为：三孢布拉霉BT7251(+)CCTCC M 2014378;三孢布拉霉BT7603(‑)CCTCC M 2014379。本发明的三孢布拉霉突变株进行常规的发酵培养后，可获得较高产量的β‑胡萝卜素。同时，整个发酵工艺简单，便于控制，有利于工业化生产。

主权项

1.含有β‑胡萝卜素的微胶囊，所述β‑胡萝卜素由三孢布拉霉突变株发酵所获得，其特征在于：所述三孢布拉霉突变株于2014年8月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为：三孢布拉霉BT7251(+)CCTCC M 2014378；三孢布拉霉BT7603(‑)CCTCC M 2014379；所述微胶囊的制备方法包括以下步骤：首先，按照下述配方经3500rpm的剪切机剪切得到壁材溶液：变性淀粉30重量份、固体玉米糖浆25重量份、麦芽糊精25重量份、抗坏血酸棕榈酸酯2重量份、维生素E 2重量份、以及纯水90重量份；然后，边剪切边加入含有β‑胡萝卜素的微生物油16重量份，添加完后在8000rpm的转速下继续剪切10min；剪切结束后，在40MPa下进行均质，得到的均质液在喷雾压力10MPa、进料速度100kg/h、进风速度220℃、出风速度90℃、以及风量5000m³/h的条件下进行压力式喷雾即可得到β‑胡萝卜素的微胶囊；所述含有β‑胡萝卜素的微生物油的制备方法包括：将β‑胡萝卜素发酵液经离心或板框进行固液分离，得到湿菌体，加入1:10m/v的无水乙醇，混匀后用胶体磨循环破碎1小时，过滤得到乙醇滤液及破碎湿菌体；破碎湿菌体加入1:10m/v的乙酸乙酯，55摄氏度下萃取三次，每次1小时；每次过滤得到溶剂相及滤渣；收集溶剂相，真空脱溶后得到含β‑胡萝卜素的微生物油；所述β‑胡萝卜素发酵液采用以下方法中的一种制备得到：方法1：(1)菌种活化：无菌环境下将三孢布拉霉正、负菌株分别接种到斜面PDA培养基中，置于培养箱内，27℃培养5d，待三孢布拉霉正、负菌株分别长出孢子后，在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面培养基中孢子刮洗下来，并配制成均匀的孢子悬液，使正、负菌株孢子悬液的浓度分别达到：10³～10⁶个孢子/mL，10³～10⁶个孢子/mL；(2)种子培养：正、负菌株分别以孢子悬液的方式接种到种子培养基中，种子培养基装在1000mL的三角瓶中，装液量100mL，培养温度为27℃，转速220r/min，正、负菌培养时间为18小时，得到三孢布拉霉正、负菌株种子液；(3)种子扩大培养：最终发酵罐的体积为2m³，依次选用容积为10L，100L的种子罐扩大培养种子液，种子罐中培养基装量为60％体积比，将步骤(2)的摇瓶种子发酵液按照正、负菌株比例为1：10的比例接种到种子罐中进行种子扩大培养，其中种子培养基为：碳源为葡萄糖；氮源为酵母粉和玉米粉；无机盐为磷酸二氢钾、硫酸镁；植物油为：玉米油；(4)发酵培养：种子罐中菌浓达到20％后，通过移种管道接入到装有1.2m³发酵培养基的2m³发酵罐中进行培养，发酵培养基同种子培养基配方，接种量5％体积比，温度：27℃±1℃；转速：200r/min；风量：2vvm；溶氧控制：20％以上；周期：120h；罐压:0.12Mpa；pH通过氢氧化钠调节到6.8，在72h前流加40g/L的植物油；方法二：(1)菌种活化：无菌环境下将三孢布拉霉正、负菌株分别接种到斜面PDA培养基中，置于培养箱内，27℃培养5d，待三孢布拉霉正、负菌株分别长出孢子后，在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面培养基中孢子刮洗下来，并配制成均匀的孢子悬液，使正、负菌株孢子悬液的浓度分别达到：10³～10⁶个孢子/mL，10³～10⁶个孢子/mL；(2)种子培养：正、负菌株分别以孢子悬液的方式接种到种子培养基中，种子培养基装在1000mL的三角瓶中，装液量100mL，培养温度为27℃，转速220r/min，正、负菌培养时间为18小时，得到三孢布拉霉正、负菌株种子液；(3)种子扩大培养：最终发酵罐的体积为12m³，依次选用容积为10L，100L，2m³的种子罐扩大培养种子液，种子罐中培养基装量为60％体积比，将步骤(2)的摇瓶种子发酵液按照正、负菌株比例为1：15的比例接种到种子罐中进行种子扩大培养，其中种子培养基为：碳源为葡萄糖；氮源为酵母浸粉和玉米粉；无机盐为磷酸二氢钾、硫酸镁；植物油为：棉籽油；(4)发酵培养：种子罐中菌浓达到20％后，通过移种管道接入到装有7m³发酵培养基的12m³发酵罐中进行培养，发酵培养基同种子培养基配方，接种量15％体积比，温度：27℃±1℃；转速：200r/min；风量：2vvm；溶氧控制：25％以上；周期：120h；罐压:0.12Mpa；通过氢氧化钠调节到6.8，在72h前流加40g/L的植物油；方法三：(1)菌种活化；无菌环境下将三孢布拉霉正、负菌株分别接种到斜面PDA培养基中，置于培养箱内，27℃培养5d，待三孢布拉霉正、负菌株分别长出孢子后，在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面培养基中孢子刮洗下来，并配制成均匀的孢子悬液，使正、负菌株孢子悬液的浓度分别达到：10³～10⁶个孢子/mL，10³～10⁶个孢子/mL；(2)种子培养；正、负菌株分别以孢子悬液的方式接种到种子培养基中，种子培养基装在1000mL的三角瓶中，装液量100mL，培养温度为27℃，转速220r/min，正、负菌培养时间为18小时，得到三孢布拉霉正、负菌株种子液；(3)种子扩大培养；最终发酵罐的体积为45m³，依次选用容积为10L，100L，2m³，12m³的种子罐扩大培养种子液，种子罐中培养基装量为60％体积比，将步骤(2)的摇瓶种子发酵液按照正、负菌株比例为1：20的比例接种到种子罐中进行种子扩大培养，其中种子培养基为：碳源为葡萄糖；氮源为酵母粉和玉米粉；无机盐为磷酸二氢钾、硫酸镁；植物油为：毛豆油；(4)发酵培养；种子罐中菌浓达到20％后，通过移种管道接入到装有25m³发酵培养基的50m³发酵罐中进行培养，发酵培养基同种子培养基配方，接种量20％体积比，温度：27℃±1℃；转速：200r/min；风量：2vvm；溶氧控制：30％以上；周期：120h；罐压:0.12Mpa；通过氢氧化钠调节到6.8，在72h前流加40g/L的植物油；方法四：(1)菌种活化：无菌环境下将三孢布拉霉正、负菌株分别接种到斜面PDA培养基中，置于培养箱内，27℃培养5d，待三孢布拉霉正、负菌株分别长出孢子后，在无菌条件下，用无菌生理盐水将斜面培养基中孢子刮洗下来，并配制成均匀的孢子悬液，使正、负菌株孢子悬液的浓度分别达到：10³～10⁶个孢子/mL，10³～10⁶个孢子/mL；(2)种子培养：正、负菌株分别以孢子悬液的方式接种到种子培养基中，种子培养基装在1000mL的三角瓶中，装液量100mL，培养温度为27℃，转速220r/min，正、负菌培养时间为18小时，得到三孢布拉霉正、负菌株种子液；(3)种子扩大培养：最终发酵罐的体积为200m³，依次选用容积为10L，100L，5m³，50m³的种子罐扩大培养种子液，种子罐中培养基装量为60％体积比，将步骤(2)的摇瓶种子发酵液按照正、负菌株比例为1：25的比例接种到种子罐中进行种子扩大培养，其中种子培养基为：碳源为葡萄糖；氮源为酵母粉和豆饼粉；无机盐为磷酸二氢钾、硫酸镁；植物油为：毛棉油；(4)发酵培养：种子罐中菌浓达到20％后，通过移种管道接入到装有120m³发酵培养基的200m³发酵罐中进行培养，发酵培养基同种子培养基配方，接种量25％体积比，温度：27℃±1℃；转速：200r/min；风量：2vvm；溶氧控制：35％以上；周期：120h；罐压:0.12Mpa；通过氢氧化钠调节到6.8，在72h前流加40g/L的植物油。