[发明专利]一种由红曲霉液态发酵法生产高纯度红曲素和红曲黄素的方法

摘要

本发明涉及一种由红曲霉液态发酵法生产高纯度红曲素(Monascin)和红曲黄素(Ankaflavin)的方法，步骤如下：⑴种子培养；⑵发酵；⑶离心；⑷干燥；⑸粉碎；⑹超声波辅助提取；⑺粗提物浓缩；⑻预分离；⑼浓缩；⑽精制；⑾干燥，得到高纯度红曲素和红曲黄素。本方法通过采用极性较小的正己烷从红曲霉发酵产物中较为专一地提取黄色素，尽量减少了红、橙色素对黄色素分离的干扰，提高了发酵法生产红曲素和红曲黄素的纯度，该方法可以实现红曲素和红曲黄素的高效、廉价制备，制备的红曲素与红曲黄素经面积归一化法计算，纯度可达99％以上。

主权项

一种由红曲霉液态发酵法生产高纯度红曲素和红曲黄素的方法，其特征在于：步骤如下：⑴种子培养：将红曲霉菌株接种到灭菌后的种子培养基中，在20‑35℃摇床中培养1‑4d，得种子液；⑵发酵：将步骤⑴中培养好的种子液以3％‑‑8％(v/v)的比例接种到发酵培养基中，30℃摇瓶培养6d，得到发酵液；⑶离心：将发酵液离心，离心条件为3500r/min，离心20min，得到发酵物沉淀；⑷干燥：将发酵物沉淀在40‑60℃下烘干至恒重，得到干燥的发酵物；⑸粉碎：将干燥的发酵物用研钵磨碎，过100目筛，得到干燥的发酵物粉末；⑹超声波辅助提取：将干燥的发酵物粉末加入正己烷，进行超声波辅助提取，料液比为1:20‑120g：mL，提取1‑4次，超声波功率为50‑100W，提取15‑45min，得正己烷粗提物；⑺粗提物浓缩：将正己烷粗提物在40℃下真空浓缩，得浓缩液；⑻预分离：将浓缩液用硅胶色谱柱进行预分离，得到黄色洗脱液，所述预分离的柱分离条件具体为：100目细度的硅胶树脂作为固定相，流动相为正己烷和乙酸乙酯，所述正己烷：乙酸乙酯的体积比为2‑8:1；⑼浓缩：将黄色洗脱液在40℃下真空浓缩至粉末状，得到色素粉末；⑽精制：配制高速逆流色谱上下相，静置分层，所述上下相由正己烷：甲醇：水的体积比10:2.5‑9:7.5‑1配制而成，将色素粉末用5mL的上相和5mL的下相溶解，用高速逆流色谱对红曲素和红曲黄素进行精制，检测波长为405nm，收集0‑200min洗脱液，得到红曲素和红曲黄素；⑾干燥：将红曲素和红曲黄素洗脱液在40℃下真空浓缩至粉末状，即得高纯度红曲素和红曲黄素。