[发明专利]一种基于银沉积的甲胎蛋白电化学免疫传感器的制备及应用

摘要

本发明涉及电化学免疫传感器技术领域，特别是涉及一种基于银沉积的甲胎蛋白电化学免疫传感器的制备及应用。具体是利用金纳米簇修饰玻碳电极表面作为抗体捕获基底，C₆₀负载金纳米复合物跟踪标记甲胎蛋白第二抗体，通过夹心免疫反应，第二抗体功能化的金纳米被捕获到传感器的表面并诱导银沉积，通过检测银纳米在KCl溶液中的电化学溶出信号实现甲胎蛋白的检测。

主权项

一种基于银沉积的甲胎蛋白(AFP)电化学免疫传感器的制备及应用，其特征在于包括以下步骤： (1)用Al₂O₃抛光粉打磨直径为4 mm的玻碳电极(GCE)，分别在乙醇和超纯水中超声清洗3 min，氮气吹干；以10 mL含有浓度为1.0 mmoL/L的HAuCl₄溶液为底液，以GCE为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为对电极在‑0.8～0.6 V电位范围内进行循环伏安扫描30圈后，将电极在0.1 moL/L的KCl溶液中浸泡过夜，用PBS(pH 7.4)缓冲液冲洗得到金纳米簇修饰玻碳电极(nano‑Au/GCE)；(2)取10 μL 1.0~2.5 μg/mL的AFP第一抗体(Ab₁)标准溶液滴涂到nano‑Au/GCE表面，在4 ℃冰箱中孵育12 h，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗除去物理吸附得到Ab₁/nano‑Au/GCE；(3)取10 μL 质量分数为1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到Ab₁/nano‑Au/GCE表面，在37 ℃下孵育1 h，以封闭非特异性结合位点，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE；(4)将10 μL 1.0 pg/mL~10ng/mL的一系列不同浓度的AFP标准溶液滴涂到BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE表面用于与抗体特异性识别，在37 ℃下孵育60 min，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到AFP/BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE；(5)滴加6~10 μL AuNPs@PAMAM‑C₆₀标记AFP第二抗体(Ab₂‑AuNPs@PAMAM‑C₆₀)到上述电极表面，在37 ℃下孵育60 min，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，再取10 μL 4~10 mmoL的银增强剂滴涂到电极表面室温下避光孵育5 min后用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于银沉积的甲胎蛋白电化学免疫传感器(Ab₂‑AuNPs@PAMAM‑C₆₀/AFP/BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE)。