[发明专利]一种纯化制备N-磺酰氨甲酰基毒素的方法在审
| 申请号： | 201510801197.3 | 申请日： | 2015-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN105237543A | 公开（公告）日： | 2016-01-13 |
| 发明（设计）人： | 杨宪立;周磊;聂冬霞;赵志勇;武爱波 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院;上海科立特农产品检测技术服务有限公司 |
| 主分类号： | C07D487/16 | 分类号： | C07D487/16;C12N1/12;C12R1/89 |
| 代理公司： | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 张竹梅 |
| 地址： | 201403 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种纯化制备N-磺酰氨甲酰基毒素的方法。该方法包括产毒藻的培养、毒素的提取、毒素的收集与纯化等步骤。此工艺简单有效，同时制备得到的N-磺酰氨甲酰基膝沟藻毒素-2(C1)和N-磺酰氨甲酰基膝沟藻毒素-3(C2)纯度可达到91％以上，可用于水产品中贝类毒素质量安全检测及科学研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 纯化 制备 磺酰氨甲酰基 毒素 方法 | ||
【主权项】：
一种纯化制备N‑磺酰氨甲酰基毒素的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)产毒藻的培养：将AT的纯藻株在无菌条件下接入含营养盐的人工海水中，纯藻株液和人工海水体积比为1:2，在f/2培养基、温度23℃、盐度2.8‑3.2％、pH 7.5‑8.5、光强16000lux和光暗比14L：10D的条件下进行藻株的培养，培养时间5天；(2)毒素的提取：藻液经0.22μm滤膜抽滤，取膜上的藻体以体积比为1：2加入提取液，室温提取两次，每次10min，4500rpm离心10min后合并两次提取液，‑20℃冷冻后弃去上层乙腈层，即得到毒素的粗提液；其中提取液为乙腈、水和甲酸按照80：19.9：0.1的体积比配制而成；(3)毒素的收集与纯化：取粗提液进入G‑15纯化系统，在0.1％乙酸为流动相的等度条件下洗脱，流速设为2.50mL/min，设置流出液的收集时间，用自动收集器收集；收集得到的流出液冷冻干燥至尽干并用0.1％乙酸定容，过0.22μm滤膜，进LC‑MS/MS对产毒种类进行定性；采用HPLC‑FLD柱后衍生‑峰面积归一法计算毒素纯度。
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