[发明专利]一种聚乙二醇-rTRAIL突变体三聚体-海兔毒素偶联物及其制备方法和应用有效
申请号: | 201510133532.7 | 申请日: | 2015-03-25 |
公开(公告)号: | CN104744584B | 公开(公告)日: | 2018-09-28 |
发明(设计)人: | 潘利强;陈枢青 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | C07K14/525 | 分类号: | C07K14/525;C07K1/107;A61K38/19;A61K47/64;A61P35/00 |
代理公司: | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人: | 胡红娟 |
地址: | 310027 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明公开了一种聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物及其制备方法和应用。一种聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物,rTRAIL突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,rTRAIL突变体三聚体上偶联有单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺以及带连接臂的海兔毒素。本发明偶联物比rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物具有更强的肿瘤细胞杀伤能力,比rTRAIL突变体‑单甲基化聚乙二醇马来酰亚胺偶联物具有更长的半衰期;表明在本发明偶联物中,单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺、rTRAIL突变体三聚体、海兔毒素并非是单独发挥各自作用的,三者之间产生了较强的协同作用。 | ||
搜索关键词: | 一种 聚乙二醇 rtrail 突变体 三聚体 海兔 毒素 偶联物 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】:
1.一种聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物,rTRAIL突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,其特征在于,所述rTRAIL突变体三聚体上偶联有单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺以及带连接臂的海兔毒素,其中,rTRAIL突变体三聚体、单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺、带连接臂的海兔毒素的摩尔比为1:(1~2):(2~1),所述单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺的分子量为3000~15000Da,所述连接臂为马来酰亚胺修饰的缬氨酸‑瓜氨酸二肽,所述的聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物的制备方法,包括以下步骤:(1)将rTRAIL突变体多聚体解聚,重新聚合得到rTRAIL突变体三聚体;(2)将rTRAIL突变体三聚体与单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺混合反应,得到聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体偶联物;(3)将聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体偶联物与带连接臂的海兔毒素混合反应,得到所述聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学,未经浙江大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201510133532.7/,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 肿瘤坏死因子β类似物、其偶联物及其医药用途-201610742896.X
- 郭凌云;唐建军;刘群奇;时小燕;徐戎 - 岳阳新华达制药有限公司
- 2016-08-26 - 2019-10-25 - C07K14/525
- 本申请涉及肿瘤坏死因子β类似物、其偶联物及其医药用途。具体而言,本申请涉及一种经工程改造的肿瘤坏死因子β类似物,其氨基酸序列选自:SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4;还涉及PEG分子和肿瘤坏死因子β或PEG分子和肿瘤坏死因子β类似物共价结合形成的偶联物。根据本申请的偶联物具有更好的体内稳定性,因此减少了静脉给药的频率,减少药物的剂量,同时还降低药物的急性毒性,增加抗肿瘤治疗效果。在动物模型中,本申请的偶联物能够预防或治疗恶性肿瘤,而具有有利的医用前景。
- TNF-α蛋白B细胞表位,含此表位的多抗原肽及应用-201610887134.9
- 张骏;张运龙;崔盈;陶厚权;王惠菊 - 浙江省人民医院
- 2016-10-11 - 2019-08-09 - C07K14/525
- 本发明提供一种TNF‑α蛋白的B细胞表位、及基于该表位、结合MAP方案合成的8分支肽构象的多抗原肽,以及在制备溃疡性结肠炎疫苗中的应用。创造性地将MAP设计方案应用于小分子自身抗原的免疫学研究领域,通过大量试验,筛选出人TNF‑α蛋白的B细胞优势表位。在此基础上,应用MAP设计方案,得到以赖氨酸为核心基质的8分支肽构象,该8分支肽构象多肽属于自体抗原表位疫苗,因而有着给药方便且次数少、只需少量注射就可以诱发产生抗体的优点;且具有安全性及耐受性好、防治兼施等优势,有望为自体抗原MAP疫苗的研发提供重要的理论基础,也可为临床治疗溃疡性结肠炎提供新的思路。
- 聚乙二醇与肿瘤坏死因子α或其类似物的偶联物及其医药用途-201510705024.1
- 郭凌云;唐建军;刘群奇;时小燕;徐戎 - 岳阳新华达制药有限公司
- 2015-10-27 - 2019-06-07 - C07K14/525
- 本发明涉及聚乙二醇与肿瘤坏死因子α或其类似物的偶联物及其医药用途。具体而言,本发明涉及一种聚乙二醇‑肿瘤坏死因子α,或聚乙二醇‑肿瘤坏死因子α类似物的偶联物,及其制备方法,以及其作为治疗剂在预防或治疗肿瘤或癌症中的用途。本发明的聚乙二醇‑肿瘤坏死因子α或其类似物的偶联物能够降低药物的急性毒性,减少静脉给药频率,减少施用药物的剂量,增加抗肿瘤治疗效果,而解决非肠道给药肿瘤坏死因子α蛋白药效半衰期短的问题,达到预防或治疗肿瘤或癌症的目标,因此具有有利的医用前景。
- 与庚型肝炎病毒E2蛋白相互作用的人类蛋白LT-α-201510596156.5
- 冯悦;杨晓钰;夏雪山;刘晓佳;赵跃 - 昆明理工大学
- 2015-09-18 - 2019-02-19 - C07K14/525
- 本发明公开了一种与庚型肝炎病毒相互作用的人类蛋白LT‑α,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,编码人类蛋白LT‑α的基因的核苷酸序列SEQ ID NO:2所示;其是利用第四代酵母双杂交的方法通过庚型肝炎病毒E2蛋白对人类T淋巴细胞cDNA文库进行筛选,获得与庚型肝炎病毒E2蛋白相互作用的人类蛋白,并通过免疫共沉淀的方法对互作蛋白进行阳性验证;本发明可为研究庚型肝炎病毒与HIV‑1病毒之间的作用机制提供一定的理论基础。
- 一种聚乙二醇-rTRAIL突变体三聚体-海兔毒素偶联物及其制备方法和应用-201510133532.7
- 潘利强;陈枢青 - 浙江大学
- 2015-03-25 - 2018-09-28 - C07K14/525
- 本发明公开了一种聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物及其制备方法和应用。一种聚乙二醇‑rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物,rTRAIL突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,rTRAIL突变体三聚体上偶联有单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺以及带连接臂的海兔毒素。本发明偶联物比rTRAIL突变体三聚体‑海兔毒素偶联物具有更强的肿瘤细胞杀伤能力,比rTRAIL突变体‑单甲基化聚乙二醇马来酰亚胺偶联物具有更长的半衰期;表明在本发明偶联物中,单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺、rTRAIL突变体三聚体、海兔毒素并非是单独发挥各自作用的,三者之间产生了较强的协同作用。
- 一种低生物活性的肿瘤坏死因子α突变蛋白及其制法和用途-201610085502.8
- 李荣秀;张丽;曾盼 - 上海亨臻实业有限公司
- 2016-02-04 - 2017-08-11 - C07K14/525
- 本发明提供了靶向肿瘤坏死因子α(TNF-α)疫苗制剂的重组蛋白抗原及其制备方法和用途。具体地,本发明的重组蛋白抗原包括对应于TNF-α氨基酸序列在11、31、32、86、87、95、115、119、143、145位上具有至少一个氨基酸突变和/或多个氨基酸突变组合。所述重组蛋白抗原在疫苗剂量下降低了TNF-α生物活性导致的副反应,同时保留了作为疫苗制剂的成分有效激发机体产生针对TNF-α的免疫反应及中和抗体。
- 一种人TNF‑α蛋白的新型纯化方法-201710330899.7
- 刘宗梁;李燕华;曹齐树;张智;李光伟 - 合肥知恩生物技术有限公司
- 2017-05-11 - 2017-07-21 - C07K14/525
- 本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种人TNF‑α蛋白的新型纯化方法,将人TNF‑α蛋白依次经过离子柱、疏水层析柱进行精细纯化,所述离子柱为至少一个阴性离子柱和/或阳性离子柱,且在两次离子柱处理之间使用除盐柱除盐处理。本发明提供了一种方便、快捷、可实验大批量样本处理的TNF‑α蛋白纯化方法。该发明基于AKTA explorer全自动蛋白纯化系统,操作简便,同时可实现样品的自动加载上样、自动洗涤、在线监测、实时观察等,能够及时的根据样品情况和后续对纯化样本的要求来调整纯化过程。最终该发明确定了一套针对TNF‑α的精度纯化方法,经过阳离子交换柱、除盐柱、阴离子交换柱、疏水层析柱的分步纯化后,获得目的蛋白的纯度可达到95%,最终蛋白纯化得率可达到70%左右。
- 一种鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白的重组蛋白及其应用-201510420091.9
- 李墨非;孙黎 - 中国科学院海洋研究所
- 2015-07-16 - 2015-12-23 - C07K14/525
- 本发明涉及分子生物学领域,具体的说是一种鱼类(半滑舌鳎)肿瘤坏死因子家族蛋白(CsTNF)的重组蛋白及其应用。鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF重组蛋白为半滑舌鳎的肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF重组蛋白,其是以半滑舌鳎cDNA为模板,用引物TNFF1和TNFR1进行PCR扩增肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF基因,扩增产物经诱导表达、纯化即为重组蛋白,该肿瘤坏死因子家族蛋白能够显著提高鱼类的抗细菌或抗病毒能力。
- 表达TNFα多肽抑制的植物细胞在治疗中的用途-201480022537.6
- 亚龙·伊兰;约瑟夫·沙尔迪尔;尤里·阿纳尼亚;塔利·基日涅尔;塔米·阿里埃勒;韦斯特兰娜·金吉斯韦利茨基 - 波塔力克斯有限公司;哈达斯特医疗研究服务和开发有限公司
- 2014-03-06 - 2015-12-02 - C07K14/525
- 提供了一种治疗选自肥胖、代谢综合征、糖尿病和肝脏疾病或病症的TNFα相关医疗状况的方法。所述方法包括向有需要的受试者肠内施用治疗有效量的表达TNFα多肽抑制剂的植物细胞,从而治疗所述TNFα相关医疗状况。
- 多位点引入对硝基苯丙氨酸的人肿瘤坏死因子-α-201510184139.0
- 高向东;田浤;陈斗;姚文兵;宋潇达 - 中国药科大学
- 2015-04-15 - 2015-07-08 - C07K14/525
- 本发明提供了一种人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)突变蛋白,并揭示其产生或增强针对机体内TNF-α分子的免疫反应的特点。利用遗传密码扩充技术,向hTNF-α中11位或/和87位定点引入非天然氨基酸对硝基苯丙氨酸(p-nitrophenylalanine,pNO2Phe),得到hTNF-α突变体蛋白。通过免疫动物,该突变体蛋白能够刺激机体产生交叉抗体,与疾病相关天然炎性因子TNF-α发生免疫反应,从而打破hTNF-α作为一种自体蛋白疫苗的免疫耐受。与原型hTNF-α和单点突变体相比,两位点突变体蛋白的免疫原性有所增强。该突变体蛋白可以作为治疗自身免疫疾病的候选分子。
- 肿瘤坏死因子α因子蛋白的全序列及其蛋白的制备方法-201310602620.8
- 杨受保;万富强;聂刘明 - 浙江中大饲料集团有限公司
- 2013-11-23 - 2015-05-27 - C07K14/525
- 本发明公开了一种肿瘤坏死因子α因子蛋白的全序列,具有序列表中SEQ ID NO.1所示的来自于池蝶蚌体内的LITAF蛋白的核酸全序列和具有序列表中SEQ ID NO.2所示的来自于池蝶蚌体内的LITAF蛋白的氨基酸序列及其蛋白的制备方法。通过本发明得到的LITAF重组蛋白可以用于制备新型基因工程抗癌药物,防治人类癌症,具有广阔的市场前景。
- 基因重组TNF-α衍生物RMP16及其制备方法与应用-201410367873.6
- 马义;洪岸;姜石松 - 暨南大学
- 2014-07-29 - 2014-12-03 - C07K14/525
- 本发明公开一种基因重组TNF-α衍生物RMP16及其制备方法与应用。通过基因重组得到的RMP16,与天然TNF-α相比,在血液中具有更高的稳定性和生理活性,可显著抑制前列腺癌Du145、淋巴瘤Raji、白血病K562、宫颈癌HeLa、乳腺癌MCF-7等肿瘤细胞的生长,对DU145的抑制效果尤为突出,且可抑制显著Du145细胞移植瘤的生长,其药效学作用与雌莫司汀相似,Du145细胞移植瘤裸鼠,结果显示,重组多肽RMP16的毒副作用明显小于雌莫司汀,无明显的毒副作用表现。该基因重组TNF-α衍生物RMP16可应用于制备具有如下功能的药物:治疗前列腺癌、淋巴瘤、慢性髓原白血病、宫颈癌、乳腺癌等肿瘤。
- 一种特异性针对Neutrokine-α蛋白的核酸适配体及其应用-201410342519.8
- 马海龙 - 马海龙
- 2014-07-13 - 2014-12-03 - C07K14/525
- 本发明提供了一种特异性针对Neutrokine-α蛋白的核酸适配体,其具有较好的结合Neutrokine-α蛋白的活性,可以用于制备成为试剂盒从而特异性的筛选以及去除Neutrokine-α蛋白。
- 一种rhTRAIL菌体的分离纯化方法-201210291064.2
- 王军;张静;李靖文 - 深圳新鹏生物工程有限公司
- 2012-08-16 - 2014-02-19 - C07K14/525
- 本发明提供了一种rhTRAIL菌体的分离纯化方法,包含粗纯工艺和精纯工艺,粗纯工艺为:将由重组DNA技术所得的rhTRAIL工程菌经扩大培养发酵所收集的菌体进行高压匀浆破碎、高速离心分离、微滤处理;精纯工艺为:将上一步粗纯工艺所得的粗纯样进行离子层析、疏水层析、凝胶过滤层析、浓缩,最终得到符合质量要求的样品。本发明工作周期短,回收率高,生产成本较低,适合大规模工业生产。
- 一种重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF及其构建和应用-201310408959.4
- 宋林生;邱丽梅;刘瑞;岳峰;孙瑞;蒋秋芬;杨传艳;衣启麟 - 中国科学院海洋研究所
- 2013-09-10 - 2013-12-25 - C07K14/525
- 本发明属于水产生物技术领域,具体的说是一种重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF及其构建和应用。重组的菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子RpTNF的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1中所示。本发明是通过表面展示技术将菲律宾蛤仔肿瘤坏死因子(RpTNF)展示于安全的微生物解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica)上。操作简单,改造后的酵母可直接应用菲律宾蛤仔的水产养殖,可增强养殖动物抗弧菌感染能力,明显提高其存活率。因而实施将其应用在水产养殖领域中。
- 一种rTRAIL突变体-单甲基化聚乙二醇马来酰亚胺偶联物及其应用-201310342861.3
- 陈枢青;潘利强 - 浙江大学
- 2013-08-07 - 2013-11-27 - C07K14/525
- 本发明公开了一种rTRAIL突变体-单甲基化聚乙二醇马来酰亚胺偶联物及其应用。该偶联物由单甲基化聚乙二醇马来酰亚胺偶联rTRAIL突变体三聚体构成,rTRAIL突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,单甲基化聚乙二醇马来酰亚胺的分子量为3000~10000Da。所述应用是指该偶联物在制备抗肿瘤药物中的应用。与现有技术相比,本发明的mPEGMAL-rTRAIL突变体偶联物质量易于控制,具有更长的半衰期,更好的稳定性、生物利用度,保留了原TRAIL分子对肿瘤细胞约20%的凋亡诱导活性,成药性更高;制备mPEGMAL-rTRAIL突变体偶联物的反应时间更短,目的产物得率更高;不存在肝毒性隐患。
- 一种血管新生蛋白及其应用-201310287526.8
- 禹艳红;陈雷;薛樱子;蔡冬青;秦俊文;齐绪峰;武征 - 暨南大学
- 2013-07-09 - 2013-10-09 - C07K14/525
- 本发明公开了一种血管新生蛋白及其应用,属于生物技术及医药领域。本发明首次发现该血管新生蛋白编码的mRNA在血管内皮细胞中表达,并通过制备抗该蛋白的多克隆抗血清确定了该蛋白在血管内皮细胞中表达,建立了大量表达及制备该蛋白的方法。且首次发现重组表达的该蛋白能够促进血管内皮细胞的迁移和管状形成,能够刺激血管内皮细胞NO的生成。本发明的血管新生蛋白在制备组织器官缺血再灌注损伤的修复、心梗、脑梗、糖尿病引起的心脏病、动脉粥样硬化的治疗药物以及伤口愈合、器官移植过程中的药物开发中的应用。
- 含有非天然氨基酸的突变蛋白及其应用-201310055191.7
- 姚文兵;黄捷;高向东;陈超;田浤 - 中国药科大学
- 2013-02-21 - 2013-07-03 - C07K14/525
- 本发明属于基因工程药物领域,涉及一类能够参与免疫调节的新型BAFF突变体。所述的BAFF突变体涉及使用原核系统表达的带有非天然氨基酸的BAFF突变体。这种BAFF突变体可以通过刺激机体产生抗体参与调节免疫系统,可用于制备治疗自身免疫疾病的药物。
- 单链化的人凋亡素2配体三聚体蛋白质的制法和用途-201110118876.2
- 王梁华;焦炳华 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2011-05-09 - 2012-11-14 - C07K14/525
- 本发明提供了以不同氨基酸连接臂连接的单链化(single chain)的人凋亡素2配体(Apo2L)三聚体蛋白质(scApo2L),以及编码这些蛋白质的DNA序列,含编码这些DNA序列的载体,含这些载体的宿主细胞,用基因工程制备这些蛋白质的方法,以及含这些蛋白质的药物组合物。本发明的单链化Apo2L三聚体蛋白质具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的作用,所以可以用于制备治疗如肿瘤等疾病的药物。
- 结合TRAIL-R1和TRAIL-R2的多肽-200980149692.3
- 凯瑟琳.鲍迪什;安克.克雷茨-罗梅尔;马克.伦肖;林冰;马萨.怀尔德 - 阿纳福公司
- 2009-10-09 - 2012-01-11 - C07K14/525
- 本发明涉及TRAIL死亡受体的激动剂,所述激动剂包括具有多聚例如三聚结构域的多肽和与TRAIL死亡受体TRAIL-R1和TRAIL-R2中至少一个相结合的多肽序列。所述激动剂不结合TRAIL诱饵受体。三聚结构域可以来自人四联蛋白。激动剂能够诱导表达TRAIL死亡受体的病原细胞中的凋亡。所述药物组合物用于治疗与表达DR4和DR5的细胞如肿瘤细胞相关的疾病。用于筛选多肽并制备多聚复合物的方法。
- 不含半胱氨酸的环状蛋白质-200880120688.X
- B·费希尔;R·卢卡斯 - 阿佩普蒂科研究和开发有限责任公司
- 2008-12-12 - 2011-02-09 - C07K14/525
- 蛋白质,其选自成熟人肿瘤坏死因子的缬氨酸Val(91)~甘氨酸Gly(121)区域的氨基酸序列或者其一部分,前提是蛋白质至少包括赖氨酸Lys(98)~谷氨酸Glu(116)区域的氨基酸序列,其中将半胱氨酸Cys(101)替换成甘氨酸,并且在赖氨酸Lys(98)侧链的氨基与谷氨酸Glu(116)侧链的羧基之间形成酰胺键;所述蛋白质激活上皮细胞离子通道、改善肺功能,并且可将其用来制备治疗与肺功能相关的疾病(如水肿)的药物。
- 三聚细胞因子的三聚结合蛋白-201010135253.1
- T·L·霍尔帝特;M·H·安德森;H·K·奥托 - 阿纳福公司
- 2003-10-29 - 2010-12-01 - C07K14/525
- 本发明提供了能结合三聚细胞因子的三聚结合单元。更具体地,提供了含有三聚化结构域和3个单体的三聚多肽,所述单体含有能结合三聚细胞因子的结合元件。优选地,该三聚结合单元以这样的方式结合,使得在结合以后,能基本上封闭三聚细胞因子的全部受体结合位点,从而抑制三聚细胞因子的潜在生物活性。一方面,本发明涉及能结合肿瘤坏死因子配体超家族的三聚细胞因子例如TNF、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL和BAFF的三聚结合物。
- 利用二价金属离子制备Apo-2配体的方法-200910145880.0
- 阿维·J·阿什克纳兹;萨拉·希莫威茨;罗伯特·F·凯利;伊菲吉妮亚·库米尼斯;苏珊·勒恩格;马克·奥康奈尔;罗杰·佩;扎拉·沙罗克;劳拉·西蒙斯 - 杰南技术公司
- 2000-06-26 - 2010-01-27 - C07K14/525
- 本发明提供了使用二价金属离子制备Apo-2配体和Apo-2配体的制剂的方法。这类二价金属离子包括锌和钴,它们改进了Apo-2配体的三聚体形成和稳定性。还提供了Apo-2配体的晶体结构,以及采用寡核苷酸定向诱变鉴定的Apo-2配体变体多肽。
- 近江牡蛎体内抗人类肿瘤HL60的sTRAIL蛋白质及其引物-200910097483.0
- 吴信忠;杨受保 - 浙江大学
- 2009-04-07 - 2009-09-09 - C07K14/525
- 本发明涉及生物技术领域,旨在提供近江牡蛎体内抗人类肿瘤HL60的sTRAIL蛋白质及其引物。该蛋白质具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列;编码该蛋白质的基因具有SEQ IDNO:1所示的核苷酸序列本发明还用于扩增权利要求2所述蛋白质的基因的寡聚核苷酸引物。本发明利用基因工程技术开发的牡蛎中sTRAIL蛋白质产品,对HL60肿瘤细胞具有杀伤性强、特异性高、安全性好、能够大量生产、易于贮存等优点。
- 专利分类