[发明专利]改良的黄灯笼辣椒叶片基因组DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种改良的黄灯笼辣椒叶片基因组DNA提取方法，针对黄灯笼辣椒叶片中富含酚类、糖类和蛋白的特点，利用正交设计优化黄灯笼辣椒基因组DNA提取中几个重要成分的浓度，筛选出一种可获得高质量DNA分子的提取方法，解决常规方法提取的DNA分子杂质较多、产率较低、易降解、易褐变、所用试剂毒性较大，影响下一步分子生物学研究的难题。采用本发明的方法得到的DNA纯度较高。DNA完整性较好、无断裂、无降解现象。

主权项

一种改良的黄灯笼辣椒叶片基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制CTAB‑3提取液，高温灭菌后，65℃预热；CTAB‑3提取液为：0.1mol L^‑1Tris pH7.5，0.05mol L^‑1EDTA pH8.0，0.7mol L^‑1NaCl，2％CTAB，0.5％PVP，0.2％DDT；其中，百分比为质量百分比浓度；(2)利用液氮将幼嫩的黄灯笼辣椒叶片研磨成粉末装入2.0mL离心管中，样品达到1/4处为宜，每管加入预热的CTAB‑3提取液700μL置于65℃恒温水浴箱中60min每隔10min轻轻摇动一次；(3)加入苯酚、氯仿、异戊醇混合液700μL充分混匀15min，动作缓慢，4℃12000rpm离心6min；苯酚/氯仿/异戊醇体积比为25∶24∶1；(4)吸取上清液转入1.5mL离心管中，加入等体积的氯仿、异戊醇混合液充分混匀15min，动作缓慢，4℃12000rpm离心6min；氯仿、异戊醇体积比为24∶1；(5)吸取上清液转入1.5mL离心管中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，置‑20℃冰箱30min沉淀；(6)用灭菌牙签挑出DNA絮状沉淀，置1.5mL离心管中，采用70％乙醇漂洗两遍，然后晾干；(7)加入100μL灭菌超纯水，4℃冰箱溶解。