[发明专利]改良的黄灯笼辣椒叶片基因组DNA提取方法有效
| 申请号： | 201310366833.5 | 申请日： | 2013-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN103898090A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 刘子记;朱婕;曹振木;杨衍;牛玉;詹园凤 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 57173*** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 改良 灯笼 辣椒 叶片 基因组 dna 提取 方法 | ||
1.一种改良的黄灯笼辣椒叶片基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制CTAB-3提取液，高温灭菌后，65℃预热；CTAB-3提取液为：0.1mol L-1Tris pH7.5，0.05mol L-1EDTA pH8.0，0.7mol L-1NaCl，2％CTAB，0.5％PVP，0.2％DDT；其中，百分比为质量百分比浓度；
(2)利用液氮将幼嫩的黄灯笼辣椒叶片研磨成粉末装入2.0mL离心管中，样品达到1/4处为宜，每管加入预热的CTAB-3提取液700μL置于65℃恒温水浴箱中60min每隔10min轻轻摇动一次；
(3)加入苯酚、氯仿、异戊醇混合液700μL充分混匀15min，动作缓慢，4℃12000rpm离心6min；苯酚/氯仿/异戊醇体积比为25∶24∶1；
(4)吸取上清液转入1.5mL离心管中，加入等体积的氯仿、异戊醇混合液充分混匀15min，动作缓慢，4℃12000rpm离心6min；氯仿、异戊醇体积比为24∶1；
(5)吸取上清液转入1.5mL离心管中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，置-20℃冰箱30min沉淀；
(6)用灭菌牙签挑出DNA絮状沉淀，置1.5mL离心管中，采用70％乙醇漂洗两遍，然后晾干；
(7)加入100μL灭菌超纯水，4℃冰箱溶解。
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