[发明专利]微生物发酵制备内切型壳聚糖酶的方法

摘要

本发明公开了一种微生物发酵制备内切型壳聚糖酶的方法，所述的微生物是浅玫瑰色链霉菌Streptomyces roseolus DH，所述的发酵方法包括菌种活化、种子液培养、发酵罐发酵产酶和粗酶液的收集步骤。本发明提供的发酵方法，可生产高活力的内切型壳聚糖酶，发酵液中内切型壳聚糖酶活力达到35U/mL，发酵周期50～60小时，该酶液可直接运用于壳寡糖的生产，发酵工艺简单，条件易控制，酶活收率高，发酵周期短，发酵液处理简单，适合用于内切型壳聚糖酶的工业化生产。

主权项

一种微生物发酵制备内切型壳聚糖酶的方法，所述的微生物是浅玫瑰色链霉菌Streptomyces roseolus DH，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：    （1）菌种活化：将保存的浅玫瑰色链霉菌Streptomyces roseolus DH接种于以胶体壳聚糖为唯一碳源的平板培养基，在30℃培养箱内倒置培养2～4天以活化菌株；所述的平板培养基配方为：(NH4)2SO4 0.51～1.0g，K2HPO4 0.21～0.5g，氯化钠0.51～1.0g，硫酸镁0.01～0.2g，胶体壳聚糖1.01～1.2g，琼脂2.0g，加水至100mL，pH 7.0～7.2；（2）种子液培养：挑取活化后的单菌落接种于液体种子培养基，在150r/min、30℃条件下进行摇床扩培菌株，培养至种子液的OD600达到0.8～1.0，待用；所述的种子培养基配方为：蛋白胨0.51～1.0g，葡萄糖0.21～0.5g，氯化钠0.8～1.0g，K2HPO4 0.02～1.0g，KH2PO4 0.01～0.05g，酵母粉0.2～1.0g，硫酸镁0.02～0.08g，加水至100mL，自然pH；（3）发酵罐发酵产酶：发酵培养基按体积百分比40%～70%的装液量装入发酵罐中，将步骤（2）中的种子液按体积百分比2.1%～3%的接种量接入发酵培养基中，所述的发酵罐为平叶涡轮搅拌型发酵罐，发酵过程中保持罐压0.08～0.11MPa，搅拌速率为180～250r/min，控制空气流速1.2～2.0m3/h，发酵温度为30～31℃，发酵时间为50～60h；所述的发酵培养基配方为：胶体壳聚糖0.9～1.2g，氯化钠0.8～1.0g，K2HPO4 0.05～0.15g，KH2PO4 0.04～0.2g，硫酸镁0.03～0.1g，酵母提取物0.2～2.0g，蛋白胨0.2～2.0g，加水至100mL，用2mol/L盐酸调pH至7.0～7.2；（4）粗酶液的收集：发酵完毕后收罐出料，离心发酵液后合并上清液，即获得内切型壳聚糖酶的粗酶液。