[发明专利]一种高正变率菌种选育方法在审
| 申请号： | 201210015119.7 | 申请日： | 2012-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN102586222A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 李小兵;段书德;姚清国;李海龙 | 申请（专利权）人： | 石家庄学院 |
| 主分类号： | C12N15/01 | 分类号： | C12N15/01;C12N13/00;C12R1/465;C12R1/80 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100 | 代理人： | 张素静 |
| 地址： | 050035 河北省*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种消除中间产物代谢积累的高效菌种选育方法，步骤为：(1)LC/MS（液相/质谱联用）分析检测出发菌株的代谢产物，找到积累最多的途径中间产物，确定代谢途径中关键步骤的代谢抑制点；（2）通过色谱制备柱分离菌株的培养物，提取积累最多的途径中间产物；（3）对步骤（2）获得的途径中间产物，筛选其抗性/忍耐突变株，通过消除代谢途径中关键步骤的代谢抑制，消除中间产物的积累，更多地流向目的产物，从而筛选到高产菌株。本发明公开的菌种选育方法，从复杂的生物合成途径中找到关键步骤，消除其中间产物的代谢抑制和积累，从而提高菌株的合成能力，大大提高了筛选效率，具有方向性强、高正变率、提高幅度大、方法简单等优点，适合于所有微生物的选育，尤其适合于生物合成途径复杂的次级代谢产物的菌种选育。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高正变率 菌种 选育 方法 | ||
【主权项】：
一种高正变率菌种选育方法，其特征在于包括如下步骤：（1）代谢产物的检测分析：出发菌株经发酵培养，培养物经分离去除营养物质，然后通过LC/MS检测分析，找出积累量最多的途径中间产物，并进行初步结构分析和确证；（2）途径中间产物的分离制备：通过色谱制备柱分离菌株的代谢产物，制备积累量最多的途径中间产物；（3）确定最低抑菌浓度：考查确定步骤（2）中制备得到的途径中间产物对于所述出发菌株的最低抑菌浓度；（4）筛选：将出发菌株用诱变剂进行诱变处理后，涂布于含有最低抑菌浓度途径中间产物的选择性平板，适宜温度下培养1‑15天，挑选上述选择性平板上生长的菌落，接种于固体斜面培养基，上述适宜温度下培养至菌落成熟，转接至摇瓶发酵培养基，上述适宜温度下摇瓶培养至发酵终点，测定产物含量，发酵水平最高的菌株，进行保藏备用；所述适宜温度和所述培养基根据出发菌株确定。
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- 2015-12-11 - 2018-01-02 - C12N15/01
- 本发明包括用于利用编辑寡核苷酸治疗医学病症或疾病的组合物和方法。编辑寡核苷酸在编辑部分的每侧上含有约10个至约50个核苷酸的寡核苷酸链，其可含有将活性编辑部分置于适当位置以与靶核酸杂交的糖或接头。编辑寡核苷酸还可含有来自基因组中的被靶向的序列的至少一种核苷酸序列变化。该方法包括利用编辑寡核苷酸修饰细胞内的基因组序列，而无需另外的蛋白质或核酸来辅助编辑过程。与未修饰的寡核苷酸或在每个末端具有三个硫代磷酸酯的寡核苷酸相比，编辑寡核苷酸可以包含增加寡核苷酸的核酸酶稳定性的主链修饰。
- 富核糖核酸啤酒酵母菌的诱变方法-201510004693.6
- 陈志颖;张子健;江建梅;舒媛;吴振 - 唐山拓普生物科技有限公司
- 2015-01-06 - 2017-12-15 - C12N15/01
- 本发明提供富核糖核酸啤酒酵母菌的诱变方法，包括以下步骤对啤酒酵母菌株进行培养，得到菌株悬浮液；将所述菌株悬浮液经过预处理，置于常压室温等离子体诱变系统中处理，筛选富核糖核酸的啤酒酵母变异株，得到QH641；对所述QH641进行发酵培养，得到高含量核糖核酸的QH641菌体。本发明的有益效果在于菌株遗传稳定性高，RNA含量的富集能力高，经发酵，最高RNA含量可达到菌体的15％‑17％。
- 一种紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法-201710499144.X
- 章云;张贝尼 - 安徽省中日农业环保科技有限公司
- 2017-06-27 - 2017-11-14 - C12N15/01
- 一种紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，属于沥青制备技术领域，包括铜绿假单胞菌接种于斜面培养基、紫外诱变、接种于平板培养基、接种于发酵培养基、乙酸萃取、制备乳化沥青。鼠李糖脂具有较强的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，对环境友好。采用本发明制备的紫外诱变鼠李糖脂乳化沥青，乳化效果好、稳定性好，具有良好的降滤失性和抑制性。采用紫外线作为诱变剂，对铜绿假单胞菌菌株进行诱变处理，获得鼠李糖脂的产量更高。
- 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法-201710671341.5
- 季一全;汤佳 - 芜湖通全科技有限公司
- 2017-08-08 - 2017-11-03 - C12N15/01
- 本发明公开了一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤葡萄糖氧化酶天然产菌株的基因的选育、诱变基因的克隆、含葡萄糖氧化酶基因工程菌构建、葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理的步骤，建立了液态发酵工艺与膜分离技术和喷雾干燥技术相耦合葡萄糖氧化酶的生产工艺流程，并研究了耐温、pH范围宽、活力高的葡萄糖氧化酶高产菌株的选育及构建、产品的稳定性；本发明的方法提升酶制剂研发、生产方面的技术水平，促进酶制剂行业的发展，减少抗生素的使用或者部分替代抗生素，提高机体的免疫力并可促进机体生长，不会产生菌体抗药性或药物残留，具有高价值的经济效益和社会效益。
- 蛹虫草紫外线二次诱变育种的方法-201710328540.6
- 周保福 - 周保福
- 2017-05-11 - 2017-09-08 - C12N15/01
- 本发明公开了一种蛹虫草紫外线二次诱变育种的方法，属于食用菌药用菌遗传育种领域。具体公开了一种在第一次诱变处理的基础上，通过第二次紫外线照射诱变处理，以提高蛹虫草菌种变异量的育种方法。本发明公开的方法能大幅度地增加蛹虫草孢子的变异量，从而有利于技术人员从诱变后的群体中筛选优良菌株，进而提高蛹虫草的药用/食用价值及其经济价值。
- 一种富硒酵母、制备方法及应用-201710281550.9
- 黄胜威;吴丽芳;王钰婷;蔡冬清 - 中国科学院合肥物质科学研究院
- 2017-04-26 - 2017-06-30 - C12N15/01
- 本发明公开了一种富硒酵母、制备方法及应用，包括以下步骤将乙醇假丝酵母Candida ethanolica进行氮离子注入诱变，经过多次诱变筛选，获得耐受高浓度亚硒酸钠的乙醇假丝酵母突变菌株，种子培养液制备，将种子培养液接种至含有发酵培养基中，发酵至对数生长期，在发酵产物中补加亚硒酸钠，继续发酵培养，收集发酵产物；将发酵液，离心洗涤，干燥后制得淡黄色粉末状产品。本发明含有大量的氨基酸及小肽，极易被动物所消化吸收，酵母中的有机硒可随着氨基酸及小肽的吸收而被生物体充分吸收，大大提高了有机硒的消化利用率。同等添加量情况下比同类产品有明显的生产性能方面的优势，或达到同等的生产性能情况下可以减少添加量，降低成本。
- 一种离子束注入裂盖马鞍菌全基因组突变及定向进化的方法-201710107510.2
- 陈恒雷;武宝山;凌海秋 - 新疆大学
- 2017-02-27 - 2017-06-13 - C12N15/01
- 本发明提供了一种离子束注入裂盖马鞍菌全基因组突变及定向进化的方法，该方法包括子实体的原产地采集及单次生子囊孢子的分离与鉴定、低能离子束注入及透明圈和营养缺陷型选择性筛选、总RNA的提取及检测、cDNA的合成及文库构建、原始文库重组率的滴度测定、EST序列分析等步骤。优选地，在离子束注入裂盖马鞍菌全基因组突变及定向进化的步骤中还包括离子束注入组合参数的优化、选择性筛选方法的设计和全基因组测序及分析的步骤，经过上述处理可获得裂盖马鞍菌创新突变菌株及全基因组突变及定向进化的分子机制。
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