[发明专利]一种c-di-GMP的分离纯化方法无效

专利信息
申请号: 201110279973.X 申请日: 2011-09-20
公开(公告)号: CN102443031A 公开(公告)日: 2012-05-09
发明(设计)人: 谷立川;朱春原;许素娟;陈颖;李冰清 申请(专利权)人: 山东大学
主分类号: C07H19/213 分类号: C07H19/213;C07H1/06
代理公司: 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 代理人: 李健康
地址: 250100 山*** 国省代码: 山东;37
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种c-di-GMP的分离纯化方法,是将c-di-GMP粗产物溶液直接上样于配有离子交换色谱柱的快速蛋白液相色谱,用pH8.0缓冲液梯度洗脱,紫外检测器254nm检测,收集出峰位置处洗脱液,用质谱确证结构,然后将含目标化合物洗脱液冻干,即制得固体c-di-GMP。本发明方法制得的c-di-GMP经反相高效液相色谱检测其纯度达95%以上,并实现了一步法直接从c-di-GMP粗产物溶液中分离纯化c-di-GMP,且本发明工艺简单,周期短,不使用毒性有机溶剂,是一种高效、环保、适合工业化生产的新方法。
搜索关键词: 一种 di gmp 分离 纯化 方法
【主权项】:
一种c‑di‑GMP的分离纯化方法,步骤是:(1)取含c‑di‑GMP的粗产物溶液,以1~5mL/min的流速,直接上样于配有离子交换色谱柱的快速蛋白液相色谱,上样量为1~1000mL;(2)上样结束后,用洗脱液A和洗脱液B梯度洗脱,流速为1~5mL/min;其中所述洗脱液A为pH8.0的缓冲液,所述缓冲液为Tris‑HCl、Na2HPO4‑NaH2PO4或K2HPO4‑KH2PO4;所述洗脱液B为A液中加入1MNaCl;(3)用紫外检测器在254nm下检测,收集出峰位置处洗脱液,用质谱确证结构,然后将含目标化合物洗脱液冻干,制得固体c‑di‑GMP;(4)以反相高效液相色谱检测,确定固体c‑di‑GMP纯度。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东大学,未经山东大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201110279973.X/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种大孔吸附树脂从催化液中分离环磷酸腺苷的方法-201910125216.3
  • 应汉杰;周精卫;顾炜炜;吴菁岚;陈勇 - 江苏集萃工业生物技术研究所有限公司
  • 2019-02-18 - 2019-06-07 - C07H19/213
  • 本发明一种大孔吸附树脂从催化液中分离环磷酸腺苷的方法,包括以下步骤:1)将含有环磷酸腺苷的催化液进行固液分离,取清液;2)将清液通过装填有大孔吸附树脂的吸附柱进行吸附,再用水、或碱液、或乙醇水溶液进行洗脱得到含有环磷酸腺苷的洗脱液;3)将含有环磷酸腺苷的洗脱液浓缩、结晶、干燥,得到环磷酸腺苷。本发明采用疏水型大孔吸附树脂在酸性条件下分离环磷酸腺苷,与采用离子交换树脂和活性炭对比,环磷酸腺苷用纯水即可洗脱,减少后续的脱盐过程,与其他杂质组分的分离度高,产品收率和纯度高,且树脂容易再生,用水量可节省约70%以上,具有一定的工业化应用前景。
  • 枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的提取方法-201811635361.8
  • 李存满;罗晓;田晶 - 河北科技大学
  • 2018-12-29 - 2019-04-19 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种枣果中环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的制备方法,该制备方法按以下步骤顺序进行:制备枣粗提物、醇沉、大孔树脂层析柱分离、膜分离、制备液相色谱分离。该方法以醇为提取液,采用大孔吸附树脂分离、膜分离、制备液相色谱分离三种分离手段,获得的环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷纯度高,环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷的纯度分别达90%以上。应用制备液相色谱还可以实现在线监测,针对性分离,分离效率高。
  • 金丝小枣中提取环磷酸腺苷的方法及在预防癌症上的应用-201811379610.1
  • 张秀清 - 天津核生科技生物工程有限公司
  • 2018-11-20 - 2019-03-01 - C07H19/213
  • 本发明公开了金丝小枣中提取环磷酸腺苷的方法及在预防癌症上的应用,包括以下步骤:步骤1,将新鲜的金丝小枣清洗除杂后去皮、去核,微波烘干后研磨成粉,得到枣粉;步骤2,枣粉与软化水按重量比1:(7~9)混合,搅拌15min,得到枣浆液;步骤3,向枣浆液中加入纤维素酶,控制pH,酶解1‑2h,得到酶解液;步骤4,将酶解液经过冷凝,冷凝温度控制在35℃‑55℃,得到残渣;步骤5,残渣用乙醇回流法提取,得到金丝小枣环磷酸腺苷提取液。本发明终止酶反应后经过冷凝再提取细胞内的环磷酸腺苷,平衡温度,提高环磷酸腺苷的提取率,提取得到的环磷酸腺苷,可以提高心肌细胞存活并预防癌症发生,在预防癌症方面有重要价值。
  • 一种从大枣中提取与分离环磷酸腺苷的方法-201810498205.5
  • 李景明;倪元颖;马丽艳;崔慧;温海超;刘璇君 - 中国农业大学
  • 2018-05-17 - 2018-10-23 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种从大枣中提取与分离环磷酸腺苷的方法,该方法包括如下步骤:将大枣用超微粉碎机粉碎,用盐酸调节提取溶剂pH至3.0,加入超纯水进行水浴提取,离心取上清液,即得环磷酸腺苷粗提液;用NaOH调节粗提液pH至12.0,室温下静置60min,用盐酸调节粗提液pH至4.5,加入CaCl2溶液,室温下静置30min,离心分离后,收集上清液;利用H103型大孔吸附树脂进行柱层析试验,工艺参数:上样液pH5,上样液浓度30μg/mL,上样液流速2mL/min,采用30%乙醇溶液进行洗脱,洗脱流速为2mL/min。该从大枣中提取与分离环磷酸腺苷的方法工艺所需材料试剂价格低廉、工艺操作简便,适用于工业化生产。
  • 一种高效提取红枣中cAMP的方法-201610553196.6
  • 白红进;周新萍;罗晓霞;刘丹;马国才;冯一峰 - 塔里木大学
  • 2016-07-14 - 2018-09-11 - C07H19/213
  • 本发明属于农产品深加工技术领域,具体涉及一种高效提取红枣中cAMP的方法。本发明所述高效提取红枣中cAMP的方法,利用现有溶剂法进行目标化合物的提取,本发明利用质量浓度为20~30wt%的乙醇溶液为提取溶剂进行提取,同时辅以超声破壁技术加强红枣中的cAMP的提取率,同时以聚乙二醇为活化试剂对红枣提取液进行活化处理,极大的提高了红枣中cAMP的溶出及提取效率。
  • 一种二丁酰环磷腺苷钙的制备方法-201410552985.9
  • 刘伟;张志刚 - 上海紫源制药有限公司
  • 2014-10-17 - 2017-04-05 - C07H19/213
  • 本发明涉及药物合成技术领域,特别涉及一种二丁酰环磷腺苷钙的制备方法。该制备方法以环磷腺苷为原料,与三乙胺在非质子溶剂下制备环磷腺苷三乙胺盐,然后以丁酸酐为酰化剂,在有机非质子性溶剂中合成二丁酰环磷腺苷,该方法与传统工艺相比较,生产周期由原来的9~10天缩短至3‑4天,粗品收率提高至78~82%,纯化后收率提高至90~94%,反应总收率提高至70~75%。本发明采用连续洗涤的方法,再经过反相萃取,获得的二丁酰环磷腺苷其液相色谱纯度达到98~98.5%。
  • 一种环磷腺苷的制备方法-201610253041.0
  • 王兴宝;卢建军;陆誉升;汪小江 - 南通宏慈药业有限公司
  • 2016-04-22 - 2016-08-10 - C07H19/213
  • 本发明涉及一种环磷腺苷的制备方法,所述制备方法主要反应步骤为先将5´‑AMP与DCC、复盐升温溶解,反应结束后,再将反应后的产物以滴加方式加入DCC的吡啶溶液中进行内环化反应,进一步抑制分子间的酯化副反应。本发明的优点在于:本发明的制备方法,操作简便、产物纯度较高,且该路线适合工业化大生产,并减少了对环境的影响。
  • 一种环磷腺苷晶型化合物-201610137144.0
  • 阎虎林 - 阎虎林
  • 2016-03-11 - 2016-05-04 - C07H19/213
  • 本发明属于医药技术领域,具体涉及一种式(I)所示的环磷腺苷晶型化合物。该化合物使用Cu-Kα射线测量得到的X-射线粉末衍射谱图如图1所示。本发明所提供的环磷腺苷晶型化合物是具有改善的溶解度和稳定性,具有更好的医药价值。
  • 一种基于环二腺核苷酸的衍生物、tat多肽及其在一型干扰素小分子中抑制剂的应用-201510620960.2
  • 陈晨;成晓亮 - 武汉品生科技有限公司
  • 2015-09-25 - 2016-03-02 - C07H19/213
  • 本申请是基于环二腺核苷酸的衍生物、tat多肽及其在一型干扰素小分子中抑制剂的应用;环二腺核苷酸衍生物1,是3‘5’环二鸟苷酸(式I)在核糖体2位羟基位置连接了一个炔烃基团(式II),分子量为696.4道尔顿,其结构如下:Sting作为一型干扰素生成通路中的重要分子,它的活性在维持细胞自发性免疫反应与炎症反应中起了至关重要的作用。因此我们通过对细菌环二腺核苷酸衍生物筛选和定向修饰,旨在开发一系列具有良好细胞通透性的小分子,可以特异性的激活或阻断Sting-TBK1-I型干扰素信号通路,从而达到促进(抗病毒)及抑制(过度免疫活化,例如系统性红斑狼疮)自发性免疫反应的作用。
  • 一种从发酵液中提取环磷酸腺苷的方法-201510134004.3
  • 任启伟;秦艳飞;蔡慧丽;李为全;刘瑞华;孟咏梅;张淑珍 - 安徽省皖北药业股份有限公司
  • 2015-03-26 - 2015-07-22 - C07H19/213
  • 本发明公开一种从发酵液中提取环磷酸腺苷的方法,属于生物活性物质提取技术领域,将发酵液加热经膜过滤后获得超滤液,将超滤液pH调节成碱性过炭层析柱吸附,用氨水洗脱,收集洗脱液,将洗脱液调节pH至碱性后,55-60℃抽真空浓缩、抽滤,将滤液pH调节至酸性后流加甲醇结晶,晶体真空干燥后得环磷酸腺苷粗品,将粗品用甲醇重结晶得环磷腺苷成品。本发明所制备的环磷酸腺苷品质稳定,纯度最高可达99%,收率最高可达75%,采用炭层析方法取代传统的离子交换和树脂层析工艺,降低了生产成本,氨水洗脱利于废水处理。
  • 一种环磷酸腺苷的生产工艺-201410158465.X
  • 彭广生;孙洪贵;李振峰;陈洪景;虞美辉 - 厦门世达膜科技有限公司
  • 2014-08-04 - 2015-01-07 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种环磷酸腺苷的生产工艺,其特征在于,包括如下步骤:步骤1陶瓷膜过滤除杂:将环磷酸腺苷发酵液通过陶瓷膜过滤设备过滤,除菌丝、悬浮物、胶体及大分子有机物于滤渣中,得到发酵液透析液;步骤2连续流体分离:发酵液透析液进入连续流体分离系统,有效成分被树脂吸附,无效成分被分离,同时洗脱液对树脂进行解析洗脱,得到环磷酸腺苷粗品;步骤3脱盐浓缩:将环磷酸腺苷粗品进行脱盐浓缩处理,得到高纯度高浓度的环磷酸腺溶液;步骤4浓缩、干燥:将环磷酸腺溶液进行真空浓缩与干燥,得高纯度环磷酸腺苷。本发明所述的环磷酸腺苷的生产工艺具有降低成本、增加收率、提高产品质量并可实现连续生产的优点。
  • 无定型二丁酰环磷腺苷钙无菌粉末-201410481945.X
  • 关屹;闫冬 - 北京赛盟医药科技发展有限公司;关屹
  • 2014-09-19 - 2015-01-07 - C07H19/213
  • 本发明提供一种二丁酰环磷腺苷钙无菌粉末及制剂,其特征在于所述二丁酰环磷腺苷钙无菌粉末为无定型晶体形态,纯度大于98%。进一步,本发明提供了无定型二丁酰环磷腺苷钙无菌粉末及其制剂的制备方法,化学合成的二丁酰环磷腺苷钙粗品溶液,经制备型高压液相色谱进行纯化,浓缩、过滤、冷冻干燥后所得无菌粉末,经X射线粉末衍射及红外吸收光谱验证,为无定型二丁酰环磷腺苷钙无菌粉末。与市售的混晶形态二丁酰环磷腺苷钙粉针制剂相比,含量更高,稳定性更好。本发明提供的无定型二丁酰环磷腺苷钙无菌粉末及其制剂用于治疗心绞痛、心肌梗塞、心肌炎、心源性休克、免疫遗传性疾病红斑狼疮和银屑病等心血管疾病。
  • 一种提取环磷酸腺苷的方法及应用-201410401250.6
  • 刘琬一;王智敏 - 刘琬一
  • 2014-08-15 - 2014-11-19 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种提取环磷酸腺苷的方法及应用,属于生物活性物质提取技术领域。本发明所提供的方法是利用碱液调节发酵液的pH后离心分离获取上清液,浓缩上清液后进行第一次脱色,利用有机溶剂分级沉淀脱色液,再溶解所得沉淀后进行第二次脱色,微孔过滤后浓缩第二脱色液,加入有机溶剂沉淀浓缩后的第二脱色液,离心分离并真空干燥沉淀后获得成品。本发明所提供的方法可取代现有的离子交换和树脂层析工艺,可降低废水量82.5%,同时生产周期大大缩短,缩短36%的生产时间;所制备的环磷酸腺苷品质稳定,纯度可达97%以上,可广泛应用于医药、食品、饲料等领域。
  • 单丁酰环磷腺苷或其盐的制备方法及应用-201410301452.3
  • 黄臻辉;琚姝;霍建丽;贾存宇 - 上海第一生化药业有限公司
  • 2014-06-27 - 2014-09-03 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种单丁酰环磷腺苷或其盐的制备方法及应用。本发明的公开的制备方法为:当制备如式I所示的单丁酰环磷腺苷时,在非质子溶剂中,在气体保护下,有机碱催化下,将环磷腺苷和正丁酸酐于避光条件下进行酰化反应;再将酰化反应的反应液与水混合,进行水解反应,即可;当制备如式I所的单丁酰环磷腺苷的盐时,在极性有机溶剂中,按照上述制备方法制得如式I所示的单丁酰环磷腺苷后,再与碱金属盐或碱土金属盐进行反应,即可。本发明公开的单丁酰环磷腺苷或其盐在二丁酰环磷腺苷或其盐药品质量控制中的应用。本法明的制备方法操作简单,能够得到高纯度的单丁酰环磷腺苷或其盐,控制二丁酰环磷腺苷药品质量。
  • 一种环磷腺苷化合物及其环磷腺苷葡胺药物组合物-201310619163.3
  • 胡成忠;李冰;刘键 - 湖北美林药业有限公司
  • 2013-11-29 - 2014-03-05 - C07H19/213
  • 本发明涉及一种环磷腺苷化合物及其环磷腺苷葡胺药物组合物。本发明环磷腺苷化合物为晶体,采用X-射线粉末衍射测定,其图谱中特征峰在2θ±0.2°为5.8°、6.9°、7.6°、11.3°、16.5°、19.2°、21.7°、22.6°、24.0°、25.9°、30.1°、31.2°、33.4°显示。本发明还提供有效成分为本发明所述的环磷腺苷化合物的注射液和环磷腺苷葡胺组合物注射液及其环磷腺苷葡胺葡萄糖组合物注射液。本发明环磷腺苷注射液相比现有技术稳定性有显著提高,处方中添加L-苹果酸、酒石酸钠可以进一步提高稳定性。
  • 一种利用超声波提取红枣中环磷酸腺苷的方法-201210106305.1
  • 李建贵;蒋劢博;王强 - 新疆农业大学
  • 2012-04-12 - 2013-10-30 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种利用超声波提取红枣中环磷酸腺苷的方法,红枣经粉碎、过筛,在水中浸泡,再在它激式超声发声,径向振动柱状换能的超声波发生器超声提取,超声波功率为100W,超声频率为35kHz,间隔2min超声一次,每次超声2min,然后提提取液过0.45μm滤膜,滤液浓缩、干燥,得到环磷酸腺苷;省却了微波处理工艺,只用上述功率和频率的它激式超声发声、径向振动柱状换能下,间隔2min超声2min的间息超声提取方式,超声波产生的空化效应较好,细胞壁破碎较完成,细胞的通透性得到增大,胞内cAMP释放较多,每克枣粉中可以提取670微克左右的环磷酸腺苷,红枣环磷酸腺苷提取率达到82%。
  • 一种具有抗过敏活性的大枣中环磷酸腺苷的提取方法-201210419236.X
  • 任迪峰;曹晨晨;王维有;吴宏力;鲁军;欧赟 - 北京林业大学
  • 2012-10-29 - 2013-01-16 - C07H19/213
  • 本发明是一种从大枣中提取具有抗过敏活性的环磷酸腺苷(cAMP)的工艺方法。将大枣经过预处理后,利用乙醇进行闪式提取(乙醇浓度40%-70%、料液比1∶20~30、提取时间20~40s)、提取液在装有大孔吸附树脂的树脂柱中进行吸附(HPD-400型树脂、pH=4.0~5.5、吸附及洗脱流速为2~4BV/H、乙醇浓度40~70%)、经过乙醇梯度洗脱解吸,解吸液浓缩、干燥后得到含cAMP的大枣提取物产品,对提取物进行Elson-Morgan法抗过敏检测,得到抑制率为76.2%。本发明具有工艺简单、提取率高、成本低、原料丰富、提取测试周期短等特点。
  • 一种分离环磷腺苷的方法-201210068263.7
  • 应汉杰;杨丽;钱文斌;吴菁岚;柏建新;陈勇;陈晓春;谢婧婧 - 南京工业大学
  • 2012-03-15 - 2012-08-01 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种分离环磷腺苷的方法,以新型螯合吸附介质为吸附剂吸附溶液中的环磷腺苷,再利用碱液作为洗脱剂对吸附剂进行洗脱,收集洗脱液,使用酸液作为再生剂对吸附剂进行再生。本发明提供的方法采用新型螯合吸附介质分离环磷腺苷,与传统树脂分离环磷腺苷相比,本发明的优点是:此吸附介质可适用于任何pH1-7条件下的环磷腺苷体系,吸附量可达到80-160mg/g树脂,环磷腺苷浓度可提高4-5倍。且此新型介质洗脱、再生过程酸、碱用量均可节约50%以上,水用量可节约20%-30%,是一种清洁环保、价格低廉、易得的吸附剂。
  • 一种c-di-GMP的分离纯化方法-201110279973.X
  • 谷立川;朱春原;许素娟;陈颖;李冰清 - 山东大学
  • 2011-09-20 - 2012-05-09 - C07H19/213
  • 本发明公开了一种c-di-GMP的分离纯化方法,是将c-di-GMP粗产物溶液直接上样于配有离子交换色谱柱的快速蛋白液相色谱,用pH8.0缓冲液梯度洗脱,紫外检测器254nm检测,收集出峰位置处洗脱液,用质谱确证结构,然后将含目标化合物洗脱液冻干,即制得固体c-di-GMP。本发明方法制得的c-di-GMP经反相高效液相色谱检测其纯度达95%以上,并实现了一步法直接从c-di-GMP粗产物溶液中分离纯化c-di-GMP,且本发明工艺简单,周期短,不使用毒性有机溶剂,是一种高效、环保、适合工业化生产的新方法。
  • 超声复合膜技术提取红枣环磷酸腺苷的一种方法-201110247110.4
  • 程伟;孙丽娟;温凯 - 食品行业生产力促进中心
  • 2011-08-26 - 2012-03-21 - C07H19/213
  • 本发明涉及超声复合膜技术提取红枣环磷酸腺苷的一种方法,解决了现有工艺提取工艺复杂、提取率低、工业化难度大、产品纯度低等问题。该工艺首先将洗净的红枣去核并粉碎,然后加入适量的乙醇溶剂,然后进行超声强化提取,提取后的滤渣再反复超声提取,合并提取汁,再分别经超滤、纳滤,除去细菌、蛋白、果胶、多糖、淀粉等大分子以及葡萄糖、果糖等单糖,截留住富含环磷酸腺苷的浓缩液,最后通过减压浓缩和喷雾干燥得到含量30%的环磷酸腺苷粉末状粗品。本发明方法操作简单,提取方便、快捷,提取时间短,环磷酸腺苷提取率高,适于工业化生产;同时,所得产品纯度含量高、纯天然、无化学无染,是进行红枣深加工综合开发的有效途径。
  • 一种分离环磷腺苷的方法-201010191525.X
  • 应汉杰;钱文斌;陈晓春;柏建新;陈勇;熊健;林晓清 - 南京工业大学
  • 2010-06-04 - 2011-12-07 - C07H19/213
  • 本发明提供一种分离环磷腺苷的方法,该方法包括用阴离子交换柱吸附环磷腺苷溶液;将碱性溶液作为洗杂剂对吸附后的阴离子交换柱进行洗杂;然后将酸性溶液作为洗脱剂对该阴离子交换柱进行洗脱。本发明提供的方法使用新型阴离子交换剂分离3′,5′-环磷酸腺苷,与传统的使用阳离子交换树脂分离3′,5′-环磷酸腺苷的方法相比,本发明的方法吸附容量大,后续洗脱工艺简单,产品回收率高。对于3′,5′-环磷酸腺苷的工业化生产而言,本发明的方法分离纯化工艺简单,生产周期短,树脂使用量少。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top