[发明专利]一种DNA结合蛋白高灵敏高通量的检测方法

摘要

本发明属于基于微阵列芯片的DNA结合蛋白检测技术，特别涉及一种超灵敏高通量微阵列芯片的DNA结合蛋白检测技术。将双链或单链寡核苷酸固定到芯片，将待筛选的细胞粗提取物同芯片直接温育，再将外切酶放入上述体系中进行温育。最后将环形探针加入体系中，进行滚环扩增。芯片上能与目标蛋白结合的特定点阵序列能作为延伸引物进行滚环扩增；而没有被蛋白结合的序列，由于被外切酶所消化则不能进行滚环扩增，最后将扩增产物同通用荧光检测探针杂交。根据芯片上特定阵列点信号的有无则可以检测出DNA结合蛋白的有无；通过点阵荧光的强度则可以定量检测出目标蛋白的含量。该芯片能实现对DNA结合蛋白的超灵敏、低成本、高特异和高通量的检测，可以广泛应用于科研和临床检测诊断之中。

主权项

1.一种DNA结合蛋白的检测方法，其特征在于其具体步骤为：首先设计寡核苷酸DNA芯片；将待筛选的粗细胞提取液同寡核苷酸DNA芯片直接温育；再将核酸外切酶III放入上述寡核苷酸DNA芯片体系中温育；再将环形探针加入寡核苷酸DNA芯片体系中，进行滚环扩增，有结合蛋白的序列能进行扩增获得荧光信号，而没有被蛋白的结合的序列，被核酸外切酶III所切割则不能进行滚环扩增，不能获得荧光信号；最后通过微阵列荧光信号的有无来判断芯片体系中DNA结合蛋白的有无，通过荧光强度则能够定量检测出DNA结合蛋白含量。