[发明专利]一种添加乙醇和/或过氧化氢胁迫枯草芽孢杆菌发酵产过氧化氢酶的方法无效
| 申请号： | 200910030830.8 | 申请日： | 2009-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN101525601A | 公开（公告）日： | 2009-09-09 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;姚丹丹;李江华;华兆哲 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08;C12R1/125 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种添加乙醇和/或过氧化氢胁迫枯草芽孢杆菌发酵产过氧化氢酶的方法，属于微生物发酵产酶技术领域。本发明利用枯草芽孢杆菌Bacillus sp.WSHDZ-01为生产菌株，通过在培养基中添加乙醇和/或过氧化氢，胁迫菌体产过氧化氢酶。过氧化氢酶产量从未胁迫前的6060U·ml-1提高到15000U·ml-1，3l罐过氧化氢酶产量达28000U·ml-1。利用此方法生产的过氧化氢酶可应用于纺织前处理。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 添加 乙醇 过氧化氢 胁迫 枯草 芽孢 杆菌 发酵 过氧化氢酶 方法 | ||
【主权项】：
1、一种添加乙醇和/或过氧化氢胁迫枯草芽孢杆菌Bacillus sp.WSHDZ-01发酵产过氧化氢酶的方法，其特征是利用Bacillus sp.WSHDZ-01为生产菌株，通过在培养基中添加乙醇和/或过氧化氢，胁迫菌体产过氧化氢酶；添加方式为：在发酵开始后0h、12h、36h分批添加培养基中体积浓度达1.0％的乙醇，总酶活达15000U·mL-1；3L罐上采取不同的乙醇添加策略使CAT酶活大幅提高：分阶段恒速流加体积浓度5％的乙醇，滴加速度为：0-12h以4.13mL/h，12-36h以10.05mL/h 36h至发酵结束以11.42mL/h滴加；或0h、12h、36h分批添加培养基中体积浓度达1.0％的乙醇；或0h一次性添加培养基中体积浓度达1.0％的乙醇；CAT最高酶活分别达28000U·mL-1，25000U·mL-1和22000U·mL-1；或在发酵开始后12h在培养基中添加培养基中体积浓度达0.3％的H2O2，总酶活达9200U·mL-1；3L罐上在发酵开始后12h一次性添加培养基中体积浓度达0.3％的H2O2，酶活可达21600U·mL-1，或12h、24h分批添加培养基中体积浓度达0.15％的H2O2，总酶活达23000U·mL-1；或在3L罐上分阶段恒速流加体积浓度5％的乙醇，滴加速度为：0-12h以4.13mL/h，12-36h以10.05mL/h，36h至发酵结束以11.42mL/h滴加和同时在12h、16h、20h、24h、28h分批添加培养基中体积浓度达0.06％的H2O2；总酶活达19000U·mL-1，其中胞外酶活达15700U·mL-1，占总酶活的82.6％，发酵时间缩短到42h。
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- 2014-11-21 - 2017-11-28 - C12N9/08
- 本发明公开了一种采用超滤法辅助双水相萃取技术提取乳过氧化物酶的方法，本发明以牛乳清为原料，采用双水相萃取技术，使牛乳清中的乳过氧化物酶全部富集到盐相，盐相溶液经超滤膜去除小的杂蛋白，进一步纯化乳过氧化物酶，通过透析袋脱盐处理，然后冷冻干燥，从而制备出高活性的可用于天然食品添加剂的乳过氧化物酶产品。采用本发明的方法可以直接制得具有天然抗菌活性的乳过氧化物酶，可以将其作为天然防腐剂直接加入到食品或牙膏等日常用品中。
- 一种稳定抗坏血酸过氧化物酶结构与活性的方法-201410283548.1
- 唐蕾;席加富;张建华;张宏建;毛忠贵 - 江南大学
- 2014-06-19 - 2017-10-31 - C12N9/08
- 本发明公开了一种稳定抗坏血酸过氧化物酶结构与活性的方法，属于酶工程领域。本发明利用将酶蛋白溶液加热变性后低温复性的方式，稳定了抗坏血酸过氧化物酶的二级结构，显著延长了抗坏血酸过氧化物酶失活的时间。利用本发明的方法步骤简单、操作方便，无需添加保护剂或改变酶的一级结构，避免了可能存在的外源添加剂干扰或一级结构改变带来的催化活力下降等缺陷。对抗坏血酸过氧化物酶性质的研究和应用具有重要的指导意义。
- 一种GPx7重组蛋白的制备方法-201410238229.9
- 孙永宪;陈欣麟;毛文伟;杜伟业;孙文立 - 上海御先医药科技有限公司
- 2014-05-29 - 2017-10-27 - C12N9/08
- 本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种重组GPx7的制备方法。本发明公开了一种GPx7重组蛋白的制备方法，包括下列步骤构建GPx7重组蛋白原核表达质粒和菌株；GPx7重组蛋白的表达；GPx7重组蛋白的抽提；GPx7重组蛋白的纯化。本发明所述制备方法步骤简单，费用低廉，纯化程度高，所制备蛋白活性良好，远优于现有技术中所采用的金属亲和层析法。
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