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[发明专利]能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌的构建方法及其应用-CN202210044897.2在审
发明人：周雍进;高教琪;李云霞 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2022-01-14 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本申请公开了一种能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸工程菌的构建方法。所述构建方法包括：敲除高产脂肪酸汉逊酵母工程菌株的LPL1基因和IZH3基因。所述构建方法通过敲除LPL1基因和IZH3基因，可以使得高产脂肪酸工程菌能够以甲醇为唯一碳源产脂肪酸。
能够甲醇唯一碳源脂肪酸工程构建方法及其应用

[发明专利]一种重组多形汉逊酵母的构建方法及其应用-CN202010626783.X有效
发明人：周雍进;高教琪;李云霞 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-07-01 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本申请提供了一种重组多形汉逊酵母菌株的构建方法及其应用，方法包括构建靶向核苷酸序列的sgRNA表达载体；将表达载体导入多形汉逊酵母菌株，敲除菌株中的OpFAA1基因。本申请还提供了一种脂肪醇合成重组汉逊酵母菌株的构建方法。构建的重组多形汉逊酵母菌株在多种碳源条件下均能够有效地积累脂肪酸。在此基础上通过增加细胞内NADPH供给，进一步提高单位生物量脂肪酸产量。同时，过表达MmCAR、npgA、ADH5、FaCoAR，并敲除基因OPFAA1或/和OpHFD1，首次在多形汉逊酵母中实现脂肪醇合成。进一步地，在高产脂肪酸菌株中游离表达JeOleT实现了α‑烯烃的合成，拓展了其在细胞工厂应用的应用潜力。
一种重组多形汉逊酵母构建方法及其应用

[发明专利]多形汉逊酵母基因编辑系统、其应用以及基因编辑方法-CN202010628649.3有效
发明人：周雍进;高教琪;高宁 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-07-01 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本申请公开了一种多形汉逊酵母CRISPR/Cas9基因编辑系统，所述系统包含以下组件：(1)Cas9蛋白，所述Cas9蛋白整合于多形汉逊酵母基因组中和(2)sgRNA表达载体；sgRNA表达载体包括sgRNA表达盒；其中，sgRNA表达盒由RNA pol II型启动子和终止子以及相应的核酶识别序列HH和HDV组成。本发明的基因编辑系统具有极高的基因组编辑效率和较高的同源整合能力，由此进一步拓展了汉逊酵母作为细胞工厂的应用潜力，使其在遗传改造过程中更加简洁、快速、方便和精准。
多形汉逊酵母基因编辑系统应用以及方法

[发明专利]一种利用微量通气提高菌株对抑制物抗性的方法-CN201610847032.4有效
发明人：袁文杰;冯华良;高教琪 -专利权人：大连理工大学
申请日： 2016-09-23 - 公布日： 2019-11-05 - 主分类号： C12P7/06 文献下载
摘要：一种利用微量通气提高菌株对抑制物抗性的方法，通过微量通气提高了对纤维素水解液中多种抑制物(甲酸、乙酸和糠醛、羟甲基糠醛)的抗性，其葡萄糖和木糖的发酵性能明显改善。通过本方法进行的木糖的发酵与未通气对照组相比，具有多种纤维素水解液抑制物耐受性，且在四种较高浓度混合抑制物条件下，发酵时间缩短，剩余木糖大幅度减少，且木糖醇产率提高。通过本方法进行葡萄糖和木糖混合碳源的发酵与未通气对照组相比，在四种较高浓度混合抑制物条件下，具有促进葡萄糖和木糖同时发酵的作用，且乙醇产率保持不变，木糖醇的产率提高。
一种利用微量通气提高菌株抑制抗性方法

[发明专利]一种来源于马克斯克鲁维酵母的烷基过氧化物还原酶和硫氧还蛋白还原酶及其应用-CN201610069049.1有效
发明人：袁文杰;高教琪;白凤武 -专利权人：大连理工大学
申请日： 2016-02-01 - 公布日： 2019-06-28 - 主分类号： C12N9/08 文献下载
摘要：本发明属于生物医学技术领域，涉及一种来源于马克斯克鲁维酵母的烷基过氧化物还原酶和硫氧还蛋白还原酶及其在提高胁迫耐受性方面的应用。烷基过氧化物还原酶基因KmTPX1基因含有594个核苷酸，编码197个氨基酸；KmTrxR基因含有960个核苷酸，编码319个氨基酸。同时，本发明所示的KmTPX1基因和KmTrxR基因能够提高酵母细胞对于多种抑制物或胁迫因子的耐受能力，如过氧化氢、甲酸、乙酸、糠醛、乙醇、氯化钠、苯酚、愈创木酚中的一种或几种。对于甲酸、乙酸、糠醛、乙醇以及盐离子浓度耐受能力的提高，使得烷基过氧化物还原酶基因和硫氧还蛋白还原酶基因在构建优良的纤维素乙醇发酵菌株方面具有至关重要的作用。
一种来源于马克克鲁酵母烷基过氧化物还原酶硫氧还蛋白及其应用

[发明专利]一种来源于马克斯克鲁维酵母的高表达启动子及其表达系统-CN201510998278.7有效
发明人：袁文杰;高教琪;李益民;白凤武 -专利权人：大连理工大学
申请日： 2015-12-28 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供了一种来源于马克斯克鲁维酵母的高表达启动子KmINU1启动子、高效外泌的信号肽及其相应的表达系统及其表达系统。其中，具有SEQ ID No.2表示的核苷酸序列的KmINU1启动子具有最强的启动活性，且活性远远高于目前报道的KmPGK启动子。本发明的KmINU1启动子无需诱导即可启动下游基因的表达，并且目的基因能在宿主细胞生长稳定后高效表达，特别适合对宿主细胞生长有影响的外源基因的表达。本发明构建的含有KmINU1启动子和高效外泌的信号肽的表达系统适用于多种酵母菌，包括酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母和马克斯克鲁维酵母等，为不同外源基因的高效表达奠定了基础。
一种来源于马克克鲁酵母表达启动子及其系统

[发明专利]一种提高酿酒酵母对纤维素水解液抑制物耐受性的方法-CN201510473797.1有效
发明人：袁文杰;相瑞娟;高教琪;李益民;侯胜博 -专利权人：大连理工大学
申请日： 2015-08-05 - 公布日： 2018-05-04 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种可以高效地获得对纤维素水解液抑制物耐性显著提升的酿酒酵母工程菌株的方法。通过过表达ABC(ATP‑binding cassette)转运蛋白基因ADP1提高酿酒酵母对纤维素水解液中多种抑制物(甲酸、乙酸和糠醛)的抗性。本发明的方法所构建的ADP1过表达菌株相比于空载对照菌株，在含有1.0g/L甲酸抑制物的条件下，发酵时间缩短12h；在含有1.8g/L糠醛抑制物的条件下，乙醇产量提高18.5％；在含有3.0g/L乙酸抑制物的条件下，残糖含量降低55.7％。本发明为解决纤维素乙醇生产中的关键问题，提高微生物对纤维素水解液抑制物抗性，提供了重要方法。
一种提高酿酒酵母纤维素水解抑制耐受方法