[发明专利]金线莲人工种子制作方法

摘要

本发明属于植物人工种子生产技术领域，主要提供了紧缺难繁药用植物金线莲的人工种子制作关键技术。具体涉及金线莲原球茎的诱导增殖及原球茎悬浮系的建立，金线莲人工种子的人工种皮包埋基质、人工胚乳及人工种子萌发基质的制备，金线莲人工种子的贮藏及播种技术，为金线莲规模化人工栽培开辟了新途径。

主权项

1.一种金线莲人工种子制作方法，其特征在于用金线莲茎段诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子，具体步骤为：(1)原球茎的诱导：将新鲜野生金线莲全草用自来水冲洗1～2h，再用肥皂水振荡3～5min，洗去肥皂水后，以无菌水冲洗一遍，用75％乙醇浸泡0.5～1min，再在0.1％HgCl2溶液中浸泡10～15min，无菌水冲洗3～5遍，吸干表面水分，去掉根和叶，剪成约1cm长的带节茎段，无菌保存备用；在无菌环境下，将消毒后的金线莲带节茎段接种在原球茎诱导培养基上，培养基组成为MS+2.0～3.0mg·l-1 6-BA+0.2～0.5mg·l-1NAA+0.5～0.8mg·l-1ZT+25.0～30.0g·l-1蔗糖+6.0～8.0g·l-1琼脂，pH 5.7～6.0；25±1℃、每日500～1000lx弱光照射10～12h的条件下培养25～30d后，外植体上先后分化出2～5个乳白色原球茎；(2)原球茎的增殖：将由金线莲带节茎段诱导出的原球茎切成2～4块移植于原球茎增殖培养基上，增殖培养基组成与诱导培养基相同；增殖培养20～25d后，分化出新的团块状丛生形原球茎增殖群体；(3)原球茎悬浮系的建立及人工种子繁殖体的获得：将原球茎团块分散后按3～5g/瓶鲜重的接种量接种于盛有50ml液体培养基的250ml三角瓶中，培养基组成为1/2MS+2.0～3.0mg·l-16-BA+0.2～0.3mg·l-1NAA+0.4～0.6mg·l-1ZT+25.0～30.0g·l-1 蔗糖，pH 5.7～6.0；25±1℃、摇床转速60r·min-1、漫射光下培养，每10d更换培养基1次，培养30d后，悬浮系中的原球茎用作金线莲人工种子的繁殖体；(4)金线莲人工种子的制作与贮藏：(a)金线莲人工种子的种皮基质为：3.0～5.0％海藻酸钠+1.0～3.0％壳聚糖+1.5～3.0％CaCl2； (b)金线莲人工种子的胚乳成分为：0.1～0.2mg·l-1NAA+0.1～0.2mg·l-1GA3+0.3～0.5mg·l-16-BA+0.3～0.5mg·l-1青霉素+0.3～0.5％多菌灵粉剂+0.2～0.4％苯甲酸钠+1.0～1.5％的蔗糖+1.0～1.5％的活性炭；(c)金线莲人工种子制作过程为：将金线莲人工种子的繁殖体，即原球茎，均匀悬浮于人工胚乳溶液后，一同注入特制的用于包埋人工种子的双重管的内管中，再将用1/2 MS液体培养基配制的3.0～5.0％海藻酸钠和1.0～3.0％壳聚糖溶液注入双重管的外管；从内管滴出的浸没在人工胚乳中的单个繁殖体，被外管流出的人工种皮凝胶包裹形成球状体后滴入1.5～3.0％CaCl2溶液中固化25～30min，即得人工种子；(d)金线莲人工种子的贮藏条件为：将金线莲人工种子盛入无菌大培养皿并用Parafilm密封后，于4℃条件下黑暗保存。