本发明提供一种物理刺激控制可生成细菌纤维素工程菌裂解的制备方法和应用,具体公开了一种物理控制细菌裂解用质粒,所述质粒中具有物理激活启动子以及受物理激活启动子调控扩增的裂解蛋白的编码基因,所述裂解蛋白的编码基因上游还具有核糖体结合位点,所述核糖体结合位点(RBS)具有如SEQ IDNO.3所述的序列,或者SEQ ID NO.3上具有1个、2个、3个或4个碱基突变的序列;本发明还公开了包含上述质粒的可生成细菌纤维素工程菌。本发明通过在宿主菌内构建裂解系统实现了其自我清除和胞内物质释放问题,条件可控、准确度高,通过调节裂解蛋白的RBS位点实现对工程菌裂解的精准的调控。