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[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9的酵母基因组稳定整合方法-CN202210053387.1有效
发明人： 连佳长;苟源蔚;张蓓;刘腾飞 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-01-18 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9的酵母基因组稳定整合方法。本发明通过筛选在酵母基因组中筛选到了17个稳定整合的位点，可以用于外源基因的稳定整合，特别是对于需要整个多个基因的化合物生物合成途径的整合，具有很好的效果。本发明开发的基于CRISPR/Cas9的酵母基因组稳定整合方法，能够实现外源基因的稳定整合，为外源基因在酵母体内的稳定组装提供了有力工具。
一种基于 crispr cas9 酵母基因组稳定整合方法

[发明专利]一种增加基因组突变率的碱基编辑系统及碱基编辑方法-CN202110769874.3有效
发明人： 连佳长;潘颖佳;董昌;夏思杨 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2021-07-07 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N15/61 文献下载
摘要：本发明公开了一种增加基因组突变率的碱基编辑系统及碱基编辑方法，所述碱基编辑系统包括编码胞嘧啶脱氨酶的基因和编码特异性单链DNA结合蛋白的基因。利用本发明构建的碱基编辑系统，对酿酒酵母基因组进行进化，在操作上具有简单，效率高等优点，在功能上，能提高β‑胡萝卜素的产量、提高对有机试剂的耐受性。并且本发明构建的基因组碱基编辑系统在毕赤酵母、大肠杆菌以及罗尔斯通氏菌等大部分工业菌株中同样适用。所以，使用本发明碱基编辑系统能够用于提高菌株的基因组突变率，基因组中突变碱基累积，造成菌体性状和功能的多样性，根据工业生产要求，可对某一性状进行连续性状筛选和定向进化。
一种增加基因组突变碱基编辑系统方法

[发明专利]一种利用木糖发酵生产三乙酸内酯的酵母工程菌及其应用-CN202211680727.X在审
发明人： 连佳长;丰林娟;黄磊 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-12-26 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用木糖发酵生产三乙酸内酯的酵母工程菌及其应用。该毕赤酵母基因工程菌的SCX培养基摇瓶发酵产量近588.5mg/L。本发明通过在三乙酸内酯合成的毕赤酵母工程菌中导入外源高效的木糖利用途经酶的编码基因，实现毕赤酵母利用木糖高效合成三乙酸内酯。本发明通过导入PK途经酶的编码基因，提高了三乙酸内酯合成的直接前体乙酰辅酶A的供应，进一步提高了毕赤酵母工程菌利用木糖合成三乙酸内酯的产量。本发明开发的毕赤酵母工程菌具有木糖利用效率高、生长速度快、产量高、副产物少等优点，为后续开发高效利用木糖合成乙酰辅酶A衍生产物的毕赤酵母底盘菌株奠定了基础。
一种利用发酵生产乙酸内酯酵母工程及其应用

[发明专利]一种生产β-榄香烯的酵母工程菌及其应用-CN202211645599.5在审
发明人： 连佳长;程锦涛;左一萌 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-12-20 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产β‑榄香烯的酵母工程菌及其应用，涉及微生物制药领域。本发明可以高效生产β‑榄香烯，其摇瓶发酵产量接近300mg/L，lL发酵罐发酵产量最高可达1.8g/L，为目前报道最高产量。本发明利用毕赤酵母高效生成β‑榄香烯，具有周期短，环保和节约资源的特点。本发明高产β‑榄香烯的毕赤酵母工程菌具有广阔的应用前景。
一种生产榄香烯酵母工程及其应用

[发明专利]一种适用于罗尔斯通式菌基因组进化的系统、应用及基因组进化方法-CN202211513260.X在审
发明人： 连佳长;汪之骄;潘浩杰 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-11-24 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于罗尔斯通式菌基因组进化的系统、应用及基因组进化方法。本发明适用于罗尔斯通式菌基因组进化的系统包括用于将编码胞嘧啶脱氨酶的基因和编码特异性单链DNA结合蛋白的基因进行融合表达的表达载体。利用本发明建立的基因组进化方法，对罗尔斯通式菌基因组进行连续进化，在操作上具有简单、高效等优点；在功能上，能提高底物消耗速率、扩展底物谱、增强对有机试剂、氧化剂及电微生物系统等生长环境的耐受性，有助于后续的合成生物学改造。所以，使用本发明的基因组进化方法能够造成菌体性状和功能的多样性，根据工业生产要求，可对某一性状(如菌株鲁棒性和生物合成效率)进行连续筛选和定向进化。
一种适用于斯通基因组进化系统应用方法

[发明专利]一种用于表达细胞色素P450的工程酵母菌株及其应用-CN202211598448.9在审
发明人： 连佳长;江丽红;董昌 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-12-12 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于表达细胞色素P450的工程酵母菌株及其应用，属于生物工程技术领域。本发明构建的利用酿酒酵母MAGIC全基因组筛选文库以提高细胞色素P450表达的酿酒酵母平台菌株构建方法，利用包含甜菜黄素生物传感器酵母菌株和酿酒酵母MAGIC全基因组筛选gRNA文库，通过全基因组扰动和荧光耦合的高通量筛选，借助流式细胞术成功筛选酿酒酵母中能提高CYP76AD1表达的靶点基因。同时，将这些微环境改造靶点基因应用于提升其他P450酶的功能性表达，证明其通用性，说明该方法能有效建立一个平台工程酵母菌株，用于多种P450酶的高活性表达。
一种用于表达细胞色素 p450 工程酵母菌株及其应用

[发明专利]一种质粒克隆培养皿消毒设备-CN202211717365.7在审
发明人：韩鲲;连佳长;郝晓然 -专利权人：徐州支点生物技术研究院有限公司
申请日： 2022-12-30 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： A61L2/07 文献下载
摘要：本申请公开了一种质粒克隆培养皿消毒设备，主要由高压蒸锅、置物篮、托板、隔离筒、隔离套、下盖、上盖、热伸缩件、凸起、连接耳、连接套、隔离囊、托板、置物套、分体、分割块、弹性块构成。本发明利用温度，驱动盖板开启或关闭，在灭菌时，保持盖板开启状态，便于高温蒸汽流过，保证灭菌效率，当消毒完成，温度降低时，自动关闭盖板，实现密封，避免发生二次污染，当生物指示剂不合格时基本可以判定在消毒过程中发生问题，便于发现和解决问题，同时，在消毒完成后，可以通过手持隔离套将置物套倒出的形式将培养皿放置在置物台后再进行手部消毒，避免外表面被污染通过手部或超净台台面间接污染消毒后的培养皿。
一种质粒克隆培养皿消毒设备

[发明专利]一种基于无细胞体系高通量筛选异戊二烯转移酶抑制剂的方法-CN202310040124.1在审
发明人：开雷;韩鲲;刘冉;岳珂;连佳长;马毅;田海英;韩园 -专利权人：江苏支点生物科技有限公司;徐州工程学院;江苏万邦生化医药集团有限责任公司;徐州支点生物技术研究院有限公司
申请日： 2023-01-12 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12Q1/48 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于无细胞体系高通量筛选异戊二烯转移酶抑制剂的方法，该方法通过制备含有异戊二烯转移酶‑FTase和GGTase‑I的抽提物，利用含有荧光基团NBD的异戊二烯基类似物，实现了在无细胞体系内，对FTase和GGTase‑I两种转移酶活性抑制剂的筛选。实现了在无细胞系统体系内原位进行目标蛋白异戊二烯化抑制剂的筛选。利用了无细胞的开放性，实现了同时针对FTase和GGTase‑I两种异戊二烯基转移酶的双抑制剂的原位一步筛选。本发明能够稳定、高效、高通量的筛选出异戊二烯基转移酶抑制剂，从而提高异戊二烯基转移酶抑制剂的筛选效率。
一种基于细胞体系通量筛选异戊二烯转移酶抑制剂方法

[发明专利]一种发酵生产三乙酸内酯的酵母工程菌及其应用-CN202211693736.2在审
发明人：黄磊;丰林娟;顾小松;连佳长 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-12-26 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种发酵生产三乙酸内酯的酵母工程菌及其应用。所述工程菌以毕赤酵母GS115为出发菌株，导入2‑吡喃酮合成酶编码基因Gh2PS，同时过表达乙酰辅酶A羧化酶基因ScACC1，进一步提高Gh2PS拷贝数，得到所述毕赤酵母工程菌。本发明开发的毕赤酵母工程菌可高效生产三乙酸内酯，其摇瓶发酵产量达到2.72g/L，1L发酵罐发酵最高产量达到9.72g/L。本发明构建了一种发酵生产三乙酸内酯的毕赤酵母工程菌，为后续开发高效合成高价值平台化合物三乙酸内酯的毕赤酵母底盘菌株奠定了基础。
一种发酵生产乙酸内酯酵母工程及其应用

[发明专利]一种酵母提取物制备器皿蒸汽消毒设备-CN202310045085.4在审
发明人：韩鲲;开雷;连佳长 -专利权人：徐州支点生物技术研究院有限公司
申请日： 2023-01-30 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： A61L2/07 文献下载
摘要：本申请公开了一种酵母提取物制备器皿蒸汽消毒设备，主要由支撑件、移动件和伸缩件构成，位于所述分汽管两侧的消毒柜体内部底端固定连接有支撑件，所述支撑件的内部与移动件活动套接，且移动件的一侧开设有移动槽，位于所述支撑件内部的消毒柜体内壁与移动件一端之间通过拉伸弹簧连接，与所述移动槽同侧的支撑件壁面开设有横孔，且支撑件通过横孔与伸缩件固定连接。本发明当柜门闭合时，伸缩件的两端受移动件作用而呈伸展状态，向上移动的气流使转动件转动，有效促使转动件带动拉绳拉回移动，进而促使第一膜的往复膨胀、压缩，实现了伸缩件内气流的水平移动，从而提高蒸汽的水平均匀性，具备增强蒸汽对器皿的消毒灭菌效果。
一种酵母提取物制备器皿蒸汽消毒设备

[发明专利]一种生产广藿香醇的酵母工程菌及其应用-CN202211644975.9在审
发明人： 连佳长;程锦涛;左一萌 -专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
申请日： 2022-12-20 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产广藿香醇的酵母工程菌及其应用，涉及微生物制药领域。本发明可以高效生产广藿香醇，其摇瓶发酵产量接近1.2mg/L，较出发菌株的产量提高了10倍。本发明利用毕赤酵母高效生成广藿香醇，具有周期短，环保和节约资源的特点。
一种生产广藿香酵母工程及其应用

[发明专利]一种用于质粒克隆培养的玻璃培养皿蒸汽消毒设备-CN202310001145.2在审
发明人：韩鲲;刘冉;开雷;岳珂;连佳长;马毅;田海英;韩园 -专利权人：江苏支点生物科技有限公司;徐州工程学院;江苏万邦生化医药集团有限责任公司;徐州支点生物技术研究院有限公司
申请日： 2023-01-03 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： A61L2/07 文献下载
摘要：本申请公开了一种用于质粒克隆培养的玻璃培养皿蒸汽消毒设备，通过设置有保温中层、保温外壳和保温内层，依据多层保温，保证培养皿消毒过程中，温度不会向外扩撒过快，与此同时，依据培养皿消毒时，通过换压扇叶和换向扇叶同步转动，换压扇叶转动使得换热腔中的气流被吹出，通过抽出的负压真空进一步的进行保温，而换向扇叶会在消毒时使得保温腔和保温内层内腔中的蒸气流动加快，增强消毒效率，而在驱动电机将换压扇叶和换向扇叶反向转动时，依据换压扇叶向换热腔中吹入的气流加快保温腔中消毒剂的散热，进而通过换向扇叶带动保温内层中气流流动时，会通过温度逐步降低，并实现对培养皿上积水的风干，最终实现了隔温蒸气消毒和降温风干效果。
一种用于质粒克隆培养玻璃培养皿蒸汽消毒设备

[发明专利]一种酵母无细胞培育后试管清洗装置-CN202210854473.2有效
发明人：韩鲲;开雷;连佳长;马毅;岳珂;刘冉 -专利权人：江苏支点生物科技有限公司;徐州支点生物技术研究院有限公司
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： B08B9/36 文献下载
摘要：本发明涉及无细胞蛋白反应技术领域，且公开了一种酵母无细胞培育后试管清洗装置，包括试管箱、清洗箱、气路总管和水路总管，所述试管箱内设有多层试管托架，所述清洗箱内设有支撑板，所述支撑板上设有清洗件和驱动件，所述驱动件驱动清洗件转动。该酵母无细胞培育后试管清洗装置，利用不同工作状态的刷毛与试管壁的阻力不同，通过清洗件在设定压力下的移动状态判断清洗件的清洗效果，并进行标记，避免未清洗干净的试管混入清洗干净的试管中，进而保证菌种培养的可靠性，其次，由于压力缓慢增大，清洗件的移动始终在压力略大于阻力的状态下进行的，清洗件的移动和试管在清洗件推力下的移动均相对轻缓，引起试管破碎的几率较小。
一种酵母细胞培育试管清洗装置

[发明专利]一种融合知识图谱的基因序列预训练方法和装置-CN202211615708.9在审
发明人：陈华钧;张孟垚;张强;连佳长;洪浩森 -专利权人：浙江大学
申请日： 2022-12-15 - 公布日： 2023-03-17 - 主分类号： G16B20/30 文献下载
摘要：本发明公开了一种融合知识图谱的基因序列预训练方法和装置，通过考虑基因之间调控关系构建基因调控图谱，并在基因调控图谱中增加motif和bin来构建基于基因调控网络的知识图谱，进而学习基因在知识图谱中的基因表示，并将知识图谱中的基因表示作为特殊token引入基因的基因序列中，提升了MLM模型对mask的预测准确性，并得到准确性的基因表示，将序列中学到的基因表示作为扩充基因调控图谱中基因的初始向量，再次经过可插拔表示模型提取基因表示，这样交替过程实现了知识图谱信息和基因序列信息的交互，利用交互训练的MLM模型提取基因表示，能够提升进而提升基因相关性质预测的准确性。
一种融合知识图谱基因序列训练方法装置

[实用新型]一种酵母无细胞孵育装置-CN202221924390.8有效
发明人：韩鲲;开雷;连佳长;马毅;岳珂;刘冉 -专利权人：江苏支点生物科技有限公司;徐州支点生物技术研究院有限公司
申请日： 2022-07-25 - 公布日： 2023-03-10 - 主分类号： C12M1/02 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种酵母无细胞孵育装置，涉及酵母菌制备技术领域，具体为一种酵母无细胞孵育装置，包括孵育罐，所述孵育罐的顶部可拆卸式固定安装有密封顶盖，所述孵育罐的底部固定安装有电动卸料阀，所述孵育罐的内部固定安装有导流管，所述孵育罐的侧面固定安装有冷热一体水循环机，且冷热一体水循环机的出水端与进水端分别与导流管两端固定连接。该酵母无细胞孵育装置，通过在孵育罐的内部设置立体结构且呈蛇形分布的导流管，使导流管可充分与物料接触，当导热介质在导流管内部流动时，可快速调节物料的温度，提高温度调节的灵敏度，满足孵育条件，提高孵育效果。
一种酵母细胞孵育装置

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