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[发明专利]一种简单高效产生乙型肝炎病毒重组cccDNA的细胞系统-CN201711285024.6在审
发明人： 袁正宏;邬敏;张小楠;陈捷亮 -专利权人：复旦大学;上海市公共卫生临床中心
申请日： 2017-12-07 - 公布日： 2019-06-18 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明属于微生物动物细胞系领域，涉及一种产生乙型肝炎病毒重组cccDNA的细胞系统，本发明利用转座子系统，将两端带有loxP位点的HBV单拷贝基因组整合入HepG2细胞，获得整合有不同拷贝数HBV基因组的克隆株HepG2‑HBV/loxP细胞系，其本身不表达HBsAg，当通过腺病毒转导引入Cre酶后，即生成rcccDNA并表达HBsAg，HBsAg的表达与rcccDNA的产生和水平密切相关；rcccDNA的生成快速且稳定，结构特征与真实HBV cccDNA类似，可以支持病毒的转录、复制和蛋白表达；所述rcccDNA可通过设计特异引物利用定量PCR定量检测，以及利用地高辛标记系统行Southern Blot检测。本发明建立的细胞系统可用于建立HBV cccDNA相关生物学研究和抗HBV药物的筛选和评价的平台。
细胞系统乙型肝炎病毒地高辛标记动物细胞系基因组整合生物学研究抗HBV药物转录蛋白表达定量检测特异引物定量PCR 单拷贝拷贝数腺病毒转座子可用位点整合转导微生物复制克隆病毒筛选引入检测

[发明专利]他扎罗汀在制备治疗乙肝病毒感染药物中的应用-CN201710671770.2在审
发明人： 袁正宏;李保存;陈捷亮 -专利权人：复旦大学
申请日： 2017-08-08 - 公布日： 2019-02-26 - 主分类号： A61K31/443 文献下载
摘要：本发明属于医药技术领域，涉及他扎罗汀(Tazarotene)在制备抑制乙肝病毒药物中的用途。本发明经病毒转染及感染细胞模型试验鉴定证实了维A酸类药物他扎罗汀具有很强的抗乙肝病毒活性，且在撤药后表现出持久抑制病毒的能力，同时在相应抗病毒工作浓度下均无细胞毒效应。本发明还公开了他扎罗汀具有相对特异的干扰cccDNA稳定性和抑制cccDNA转录的活性；以及公开了同属维A酸类药物且为他扎罗汀类似物阿达帕林(Adapalene)亦具有抗乙肝病毒活性，本发明为他扎罗汀及其类似物用于临床抗乙肝病毒干预及为制备基于他扎罗汀及其类似物和衍生物的新型抗乙肝病毒药物提供了技术和理论基础。
他扎罗汀类似物制备抗乙肝病毒活性维A酸类药物抗乙肝病毒药物医药技术领域治疗乙肝病毒抗乙肝病毒阿达帕林病毒转染感染细胞感染药物理论基础模型试验乙肝病毒转录抗病毒无细胞病毒干预应用表现

[发明专利]人α干扰素亚型在制备抗乙型肝炎病毒药物中的用途-CN201710663647.6在审
发明人： 袁正宏;陈捷亮;李亚明 -专利权人：复旦大学
申请日： 2017-08-06 - 公布日： 2019-02-26 - 主分类号： A61K38/21 文献下载
摘要：本发明属医药和生物工程学领域，涉及人α干扰素亚型在制备抗乙肝病毒药物中的应用，本发明针对现有技术中用于治疗慢性乙型肝炎的人基因组编码干扰素亚型IFN‑α2应答率较低而副作用较大的问题，经体外病毒转染及感染模型鉴定提供了包括IFN‑α14，IFN‑α6和IFN‑α1的多种α干扰素亚型，经试验显示，所述的多种α干扰素亚型相较IFN‑α2具有更强的抗乙肝病毒活性，且在抗病毒浓度下无细胞毒效应，其中IFN‑α14具有最强的抗HBV活性。本发明所述的多种α干扰素亚型可用于制备新的抗乙肝病毒效应显著好的抗乙肝病毒药物。
干扰素亚型亚型人α干扰素制备治疗慢性乙型肝炎抗乙肝病毒活性抗乙肝病毒药物抗乙型肝炎病毒制备抗乙肝病毒编码干扰素抗乙肝病毒生物工程学病毒转染模型鉴定人基因组抗病毒无细胞可用体外应答感染试验应用

[发明专利]可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒-CN201710205811.9在审
发明人：胡芸文;宋志刚;袁正宏;张慧英;张晓玲 -专利权人：复旦大学;上海市公共卫生临床中心
申请日： 2017-03-31 - 公布日： 2018-10-16 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明提供可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒。本发明的检测试剂盒包括一个或多个固体载体、以及独立地连接于所述固体载体上的SEQ ID NO：1~6所示的多肽。当以是否SEQ ID NO：1~6所示的多肽全部对受试者来源的血液样本中的IgM有响应作为判定受试者是否已被人肠道病毒71型感染的指标的情况下，可以以92%以上的灵敏度和5%以下的假阳性率诊断人肠道病毒71型感染。
人肠道病毒71型感染试剂盒诊断多肽可用假阳性率检测试剂血液样本灵敏度地连接判定响应

[发明专利]甲型流感病毒全基因组通用扩增方法-CN201710175087.X在审
发明人：王蔚;胡芸文;袁正宏;刘祎 -专利权人：上海市公共卫生临床中心
申请日： 2017-03-22 - 公布日： 2018-10-09 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种甲型流感病毒全基因组通用扩增方法PIFAWGA，本发明通过使用接力半特异扩增策略，提高病毒全基因组扩增效率。该方法可用于低病毒拷贝临床样本中流感病毒核酸富集，使其达到二代测序所要求目标核酸启始量要求。经检测实验结果显示，本方法能稳定有效的扩增甲流病毒基因组，适用的病毒核酸样本最低原始浓度为104 copies/ml，本方法能获得更多的流感病毒全长基因扩增产物，而且产物长度均一化好，减少了后期二代测序DNA建库过程中样本损耗，有利于其达到二代测序对样本DNA起始量的要求，适用于低病毒拷贝临床标本。
测序扩增甲型流感病毒流感病毒病毒拷贝全基因组样本病毒全基因组生物技术领域病毒核酸核酸富集甲流病毒扩增产物扩增效率临床标本临床样本目标核酸全长基因特异扩增样本DNA 通用基因组均一化起始量建库可用接力检测

[发明专利]苯并噻唑类化合物及其作为药物的用途-CN201410245448.X有效
发明人：盛春泉;袁正宏;朱仕平;张小楠;张万年;董国强;缪震元;姚建忠;刘娜 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学;上海市公共卫生临床中心
申请日： 2014-06-04 - 公布日： 2018-07-17 - 主分类号： C07D417/12 文献下载
摘要：本发明涉及医药技术领域，本发明提供了一种苯并噻唑类化合物，包括其消旋体、d‑型或l‑型异构体，该化合物的结构通式如式(I)所示。本发明的化合物经药理实验表明，对HCV具备较好的抑制作用，且作用于HCV的非结构蛋白NS5A靶点，具有较好的体外抗HCV活性。本发明还提供了上述化合物的制备方法，以及在制备抗HCV抑制剂的应用。
式( I )苯并噻唑类化合物制备医药技术领域非结构蛋白上述化合物结构通式药理实验消旋体异构体靶点体外应用

[发明专利]一种肝组织中HBVDNA与cccDNA的原位杂交检测试剂盒-CN201610465331.1在审
发明人： 袁正宏;张小楠 -专利权人：上海市公共卫生临床中心
申请日： 2016-06-24 - 公布日： 2018-01-05 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明属分子生物学和医学领域，涉及一种检测肝组织中HBV DNA与cccDNA的原位杂交试剂盒，尤其是一种在慢性乙型肝炎患者肝活检组织切片中HBV DNA与cccDNA (共价闭合环状DNA)的原位杂交检测试剂盒及检测方法，所述试剂盒包括靶向HBV负链DNA与cccDNA特异性区域互补探针及半抗原偶联的信号扩增寡核苷酸，其中，在与酶偶联的半抗原结合蛋白共孵育后，通过化学显色方法获得HBV DNA，cccDNA的组织内定位。本发明的检测试剂盒适用于慢性乙型肝炎患者肝内病毒学水平的评价与抗病毒疗效的评价；有助于临床医师获得对慢乙肝患者肝脏组织学与病毒学更完整的信息，并为慢乙肝个体化治疗提供数据支持。
一种组织 hbvdna cccdna 原位杂交检测试剂盒

[发明专利]IFN‑α处理细胞所分泌外体在制备抑制肝炎病毒的药物中的应用-CN201310278403.8有效
发明人： 袁正宏;李建华 -专利权人：复旦大学
申请日： 2013-07-04 - 公布日： 2017-11-17 - 主分类号： A61K38/21 文献下载
摘要：本发明属分子生物学和医药领域，涉及干扰素‑alpha处理细胞所分泌外体作为新型抗乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染等治疗药物的应用研究。本发明提供了外体在制备抑制乙肝病毒或者丙肝病毒的药物中的应用，所述的外体由干扰素‑alpha处理的细胞分泌产生。本发明还提供了体外抑制细胞中肝炎病毒的方法及药物。外体被肝细胞内化后能抑制其内乙肝病毒和丙肝病毒的复制，展示了IFN‑α刺激细胞所分泌外体作为一种新型的抗HBV和HCV的药物的前景并提供了实验理论基础。
ifn 处理细胞分泌制备抑制肝炎病毒药物中的应用

[发明专利]TALEN在制备靶向干预乙肝病毒的药物中的应用-CN201310354673.2在审
发明人： 袁正宏;陈捷亮 -专利权人：复旦大学
申请日： 2013-08-14 - 公布日： 2015-02-25 - 主分类号： A61K38/46 文献下载
摘要：本发明属医药领域，涉及TALEN技术在靶向乙肝病毒基因组即cccDNA及治疗慢性乙肝病毒感染中的应用。本发明提供了转录激活因子样效应因子核酸酶在制备靶向干预乙肝病毒的药物中的应用，其中靶向干预乙肝病毒的药物中的活性成分为针对乙肝病毒基因组的转录激活因子样效应因子核酸酶。本发明还提供了一种针对乙肝病毒基因组的转录激活因子样效应因子核酸酶，以及利用其抑制体外培养细胞中的乙肝病毒的方法。本发明采用TALEN技术在细胞系中可通过特异性靶向乙肝病毒cccDNA显著抑制乙肝病毒基因组的转录活性并导致乙肝病毒基因组DNA含量的下降。
talen 制备靶向干预乙肝病毒药物中的应用

[发明专利]酵母来源葡聚糖在制备治疗乙肝病毒感染的药物中的应用-CN201210189690.0有效
发明人： 袁正宏;羽晓瑜;周晓辉;任广旭 -专利权人：上海市公共卫生临床中心
申请日： 2012-06-11 - 公布日： 2014-01-01 - 主分类号： A61K31/716 文献下载
摘要：本发明属医药领域，涉及酵母来源葡聚糖在制备治疗乙肝病毒感染的药物中的应用，尤其是在制备降低或消除乙型肝炎病毒慢性感染患者血清表面抗原的药物中的应用。本发明经试验证实，所述的酵母来源的葡聚糖可以调节小鼠脾脏细胞中细胞因子表达，上调IL-12、IL-1、TNF表达，下调抑制性细胞因子IL-10表达；能促进HBV C57BL/6J-TgN转基因小鼠mDC的成熟，上调mDC表面协同刺激分子CD80、CD86表；能够明显增强HBV感染患者外周血来源PBMC IFN-γ的生成。所述的酵母来源葡聚糖可以制备治疗乙肝病毒感染的药物，尤其是制备降低或消除乙型肝炎病毒慢性感染患者血清表面抗原的药物，以及作为免疫增强剂辅助HBV感染的治疗。
酵母来源聚糖制备治疗乙肝病毒感染药物中的应用

[发明专利]膜联蛋白A3在检测酒精性肝纤维化中的用途-CN201110366184.X有效
发明人：张丽军;袁正宏;马芳;贾小芳;姚亚敏;刘晓茜 -专利权人：上海市公共卫生临床中心
申请日： 2011-11-17 - 公布日： 2013-05-22 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及膜联蛋白A3在检测酒精性肝纤维化中的用途。本发明通过筛选在酒精性肝纤维化和正常肝脏的肝非实质细胞中存在差异表达的蛋白，获得在酒精性肝纤维化的肝非实质细胞中低表达的蛋白质——膜联蛋白A3(ANXA3)，经免疫印迹实验进一步证实了所述ANXA3在酒精性肝纤维化的肝非实质细胞中有较低的表达水平。实验结果证实，所述的膜联蛋白A3可作为分子标志用作检测酒精性肝纤维化；所述的膜联蛋白A3的特异性的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，可用于制备检测酒精性肝纤维化制剂；所述的抗膜联蛋白A3的抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，可用于制备检测酒精性肝纤维化试剂盒。
蛋白 a3 检测酒精性纤维化中的用途

[发明专利]一种预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的血浆miRNA谱及检测试剂盒-CN201110041465.8有效
发明人： 袁正宏;张小楠;邬敏;陈良;张继明;张欣欣;张占卿;吴景迪;王介非;陈晓蓉;黄涛 -专利权人：上海市公共卫生临床中心
申请日： 2011-02-21 - 公布日： 2012-08-22 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学和医学领域。本发明提供了一种预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的血浆miRNA谱及检测试剂盒，该miRNA谱包括SEQIDNO1-11中一个或多个miRNA。同时提供了相应的、高效、低廉的试剂盒和检测芯片以及检测方法。本发明检测血浆、血清中miRNA水平，适合应用于临床判断干扰素治疗的有效性。与其他已知与疗效相关因素相比，此表达谱是一个独立的预测因素。将此预测谱与病人治疗前ALT水平结合可获得更高的预测准确率。此表达谱与HBV耐药突变分析结合将有助于个体化治疗方案的开展，最终降低治疗费用并提高完全应答的比例。
一种预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效血浆 mirna 检测试剂盒

[发明专利]用于预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的血浆miRNA谱及检测试剂盒-CN201010275561.4无效
发明人： 袁正宏;张小楠;邬敏;陈良;张继明;张欣欣;张占卿;吴景迪;王介非;陈晓蓉;黄涛 -专利权人：上海市公共卫生临床中心
申请日： 2010-09-08 - 公布日： 2012-04-04 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学和医学领域。本发明提供了一种预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的血浆miRNA谱，该miRNA谱包括SEQIDNO1-10中一个或多个miRNA。同时提供了相应的、高效、低廉的试剂盒和检测芯片以及检测方法。本发明检测血浆、血清中miRNA水平，适合应用于临床判断干扰素治疗的有效性。与其他已知与疗效相关因素相比，此表达谱是一个独立的预测因素。此表达谱与HBV耐药突变分析结合将有助于个体化治疗方案的开展，最终降低治疗费用并提高完全应答的比例。
用于预测干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效血浆 mirna 检测试剂盒

[发明专利]NADH脱氢酶黄素蛋白2在制备检测药物中的应用-CN201010192412.1有效
发明人：张丽军;袁正宏;马芳;贾小芳;姚亚敏 -专利权人：复旦大学
申请日： 2010-06-03 - 公布日： 2011-12-07 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，涉及一种NADH脱氢酶黄素蛋白2的应用。本发明通过筛选在免疫性肝纤维化和正常肝脏的肝非实质细胞中存在差异表达的蛋白，找到了一种在免疫性肝纤维化的肝非实质细胞中高表达的蛋白，反转录聚合酶链式反应实验进一步证实了NADH脱氢酶黄素蛋白2的确在免疫性肝纤维化的肝非实质细胞中有较高的转录水平。鉴于NADH脱氢酶黄素蛋白2与免疫性肝纤维化的这种相关性，该蛋白可以在制备检测免疫性肝纤维化药物中应用。NADH脱氢酶黄素蛋白2的应用为检测免疫性肝纤维化提供了一条全新的途径。
nadh 脱氢酶黄素蛋白制备检测药物中的应用

[发明专利]一种控制乙型肝炎病毒持续性感染的疫苗-CN200910196983.X有效
发明人： 袁正宏;卞广林 -专利权人：复旦大学
申请日： 2009-10-10 - 公布日： 2011-05-04 - 主分类号： A61K39/29 文献下载
摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种控制乙型肝炎病毒持续性感染的疫苗。本发明利用热灭活的表达乙肝表面抗原的汉逊酵母细胞作为乙肝疫苗，其中HBsAg是疫苗的抗原部分，汉逊酵母细胞为疫苗的佐剂部分。动物免疫实验证实：该疫苗能够诱导免疫细胞向脾脏聚集，促进DCs的成熟，该疫苗不但能够在小鼠体内诱生Th1方向的免疫应答，而且还能够增强Th2方向的免疫应答，包括总IgG，IgG1，IgG2a，特异性CTL活性，抗原特异的IFN-γ产生能力。本发明能弥补以氢氧化铝作为佐剂的传统乙肝疫苗不能诱生Th1型免疫应答的缺陷，有助于控制HBV的持续性感染。
一种控制乙型肝炎病毒持续性感染疫苗