本发明公开了一种同步检测5种柑橘病毒的DPO RT‑PCR引物组、检测方法、试剂盒及其应用,引物组的序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.10所示。本发明通过对柑橘衰退病毒、柑橘碎叶病毒、柑橘裂皮病毒、柑橘黄化脉明病毒、柑橘叶斑驳病毒设计特异性DPORT‑PCR引物,检测引物可有效去除引物二聚体干扰,可同时从样品中检测出这5种病毒,检测方法简便高效,仅需要使用普通PCR仪和电泳仪即可进行检测,具有快速、经济、准确度高和灵敏度高的特点,可用于田间柑橘植株的大规模筛查和种苗调运前的防疫检测,为健康种苗检测及病害的田间筛查提供了技术支撑。