本发明属于虾蟹类基因工程技术领域,涉及脊尾白虾雄性性别分化控制基因EcIAG及引导RNA与应用。本发明所涉及的脊尾白虾IAG(EcIAG)基因序列为列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列;基于该序列设计合成的引导RNA分别为序列列表中SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的核糖核酸序列,将EcIAG‑gRNA1、EcIAG‑gRNA2与商品化Cas9蛋白共同混合后注射脊尾白虾的受精卵,可以特异性靶向EcIAG基因第二外显子的两个PAM识别位点,对两个PAM位点中间的DNA序列进行切割,实现EcIAG基因的敲除,在EcIAG基因敲除个体观察到脊尾白虾的性逆转。
本发明涉及由凡纳滨对虾基因组中多WAP编码基因转录并经选择性剪切产生的一组类Crustin抗菌肽的获取及其抗菌应用。该组成熟mRNA分子编码类Crustin抗菌肽LvTWD‑C1W1C3、LvTWD‑W2C4和LvTWD‑C3W2C4,分别由SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示的氨基酸序列组成。本发明利用表达载体pET32a(+)和表达菌株大肠杆菌BL21,对LvTWD‑C1W1C3、LvTWD‑W2C4和LvTWD‑C3W2C4分别进行原核重组表达,并获得了具有生物学活性的重组蛋白。对其生物学功能进行体外验证,证实重组蛋白能够对多种细菌产生有效的抑制作用。
本发明涉及一种小分子多肽及其抗菌抗病毒应用。本发明所涉及的小分子多肽具有序列列表中SEQ ID No.1所示的氨基酸序列及结构特征;该小分子多肽衍生自序列列表中SEQ ID No.2所示凡纳滨对虾抗脂多糖因子LvALF8;经对本发明涉及的小分子多肽进行功能活性测试,证实其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和病毒的生长或增殖均具有很强的抑制作用。
本发明涉及一种脊尾白虾复眼发育调控基因EcEy被成功编辑后可以在胚胎时期出现表型的明显变化,以指示基因编辑操作的成功率,此基因也可应用到其他十足目甲壳动物基因编辑平台的建立。本发明所涉及的脊尾白虾EcEy基因具有序列列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列;基于该序列设计合成的引导RNA(gRNA)具有序列列表中SEQ ID No.2所示的核糖核酸序列,将EcEy‑gRNA与商品化Cas 9 mRNA混合注射脊尾白虾受精卵,可以特异性地识别EcEy基因的PAX结构域并进行切割,在胚胎发育早期观察到明显的复眼缺陷表型。EcEy基因可作为脊尾白虾基因编辑研究的靶基因,用于验证基因编辑操作成功与否,也可用于其他十足目甲壳动物基因编辑平台的建立。