本发明公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒,所述试剂盒包括:金黄色葡萄球菌的扩增引物和探针,包括:如SEQ ID NO.1所示的nuc‑F引物、如SEQ IDNO.2所示的nuc‑R引物和如SEQ ID NO.3所示的nuc探针;甲氧西林抗性基因的扩增引物和探针,包括:如SEQ ID NO.4所示的mecA‑F引物、如SEQ ID NO.5所示的mecA‑R引物和如SEQ ID NO.6所示的mecA探针;内参基因的扩增引物和探针,包括:如SEQ ID NO.7所示的内参‑F引物、如SEQ ID NO.8所示的内参‑R引物和如SEQ ID NO.9所示的内参探针。特异性强、检测灵敏度高,抗干扰能力强。