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[发明专利]一种创制四倍体鱼类育种材料的静水压方法及应用-CN202310870775.3在审
发明人：胡炜;蒋银军;宋焱龙;罗红瑞;陶彬彬;陈戟;罗大极;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所;岭南现代农业科学与技术广东省实验室
申请日： 2023-07-14 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： A01K67/027 文献下载
摘要：本发明属于水产动物遗传育种技术领域，公开了一种创制四倍体鱼类育种材料的静水压方法及应用，具体为在26‑28℃水温，将受精后80~95min的黄鳝受精卵置于700‑750kg/cm2的静水压条件下处理3‑5min，孵育出苗即可获得四倍体黄鳝。利用该技术可以创制出四倍体的黄鳝，方法简单，诱导效率高，为培育黄鳝优良养殖品种提供了强有力的技术手段，利用本发明的方法创制四倍体黄鳝，为进一步培育出三倍体的黄鳝奠定了基础，为培育黄鳝新品系和新品种提供了新的技术手段。
一种创制四倍体鱼类育种材料静水方法应用

[发明专利]一种鱼类复合催产剂及其在高体鰤人工催产中的应用-CN202210277076.3在审
发明人：胡炜;朱春华;宋焱龙;黄洋;陶彬彬;陈戟;罗大极;李广丽;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所;南方海洋科学与工程广东省实验室（湛江）
申请日： 2022-03-21 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： A61K38/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种鱼类复合催产剂及其在高体鰤人工催产中的应用。一种鱼类复合催产剂，包括：待催产鱼的促性腺激素释放激素类似物，待催产鱼的分泌粒蛋白和鱼类常规使用的商品化催产剂。专门针对高体鰤，申请人根据上述复合催产剂，提供了高体鰤的高效复合催产剂，由高体鰤促性腺激素释放激素类似物、高体鰤分泌粒蛋白、地欧酮和绒毛膜促性腺激素组成。通过胸腔注射繁殖期性成熟的高体鰤诱导雌雄个体交配繁殖子代。该催产剂成本低、操作简便、对高体鰤催产效率高，具有明显的应用价值和经济效益。
一种鱼类复合催产及其高体鰤人工中的应用

[发明专利]一种鱼类皮肤粘液腺生物反应器的制备方法及其应用-CN201910912452.X有效
发明人：崔宗斌;周同;周波兰;龙勇;宋桂丽;李青;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2019-09-25 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于动物生物反应器制备技术领域，尤其涉及一种鱼类皮肤粘液腺生物反应器的制备方法及其应用。包括：鉴定鱼类皮肤粘液腺细胞特异表达基因、启动子和分泌蛋白信号肽，构建可在鱼类皮肤和粘液腺细胞中特异表达内源或异源生物活性物质的转基因表达载体，研制能够稳定遗传和将生物活性物质分泌到鱼类粘液中的转基因鱼类，将粘液腺分泌的生物活性物质用于动植物生长、抗逆和抗病，人类的健康保健与疾病防治，以及商业用酶类。本发明研制的鱼类皮肤粘液腺生物反应器具有繁育扩群容易、皮肤粘液分泌多、粘液收集方便、生物活性物质容易纯化等特点，可实现鱼类皮肤粘液腺生物反应器的规模化生产和高效应用。
一种鱼类皮肤粘液生物反应器制备方法及其应用

[发明专利]一种人工诱导黄鳝直接定向发育为雄性的培育方法-CN202210017492.X有效
发明人：宋焱龙;蒋银军;陶彬彬;陈戟;罗红瑞;朱作言;胡炜 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2022-01-08 - 公布日： 2023-02-28 - 主分类号： A01K61/10 文献下载
摘要：本发明属于水产动物遗传育种技术领域，公开了一种人工诱导黄鳝直接发育为雄性的培育方法，其步骤：A：驯化黄鳝幼鱼摄食配合饲料；B：饲喂含有来曲唑的配合饲料；C：饲喂来曲唑的黄鳝生长到6月龄时性腺转化为精巢，黄鳝直接发育为雄性。方法易行，操作简便，将1年龄的黄鳝直接诱导为雄性且具备正常的生殖能力。该方法可以直接获得不经过雌性成熟阶段而直接发育为雄性的黄鳝，能有效应用于黄鳝苗种生产和遗传育种研究，具有重要的应用价值。
一种人工诱导黄鳝直接定向发育雄性培育方法

[发明专利]一种鲟鱼显微注射的方法及应用-CN201711282296.0有效
发明人：胡炜;胡红霞;陈戟;朱华;王巍;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所;北京市水产科学研究所
申请日： 2017-12-07 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明公开了一种鲟鱼显微注射的方法及应用，在鲟鱼卵受精后的二十分钟内向鲟鱼1细胞期受精卵动物极的受精孔中进行显微注射，当质粒注射浓度为50‑100 ng/μL时，能同时保证基因转移的高成功率50‑70%，以及受体鲟鱼胚胎经显微操作处理后的高存活率83‑90%，利用该方法进行鲟鱼内源或外源基因编辑，也可获得高存活率和高突变率的胚胎，为开展鲟鱼基因的功能研究和鲟鱼养殖品种的遗传改良提供了强有力的技术手段。
一种鲟鱼显微注射方法应用

[发明专利]一种鲟鱼TALEN基因编辑方法-CN201711282301.8有效
发明人：胡红霞;陈戟;胡炜;朱华;王巍;朱作言 -专利权人：北京市水产科学研究所;中国科学院水生生物研究所
申请日： 2017-12-07 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种鲟鱼TALEN基因编辑方法，包括将靶基因质粒和针对靶位点的TALEN mRNA混合后，利用显微操作的方式注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵动物极的受精孔中，将靶基因质粒和针对靶位点的TALEN mRNA按1:3浓度比例混合后，采用显微注射方法按100 ng/µL质粒浓度导入小体鲟1细胞期的受精胚中，可以获得存活率74%，外源靶基因突变率高达93%的小体鲟胚胎，本发明第一次建立鲟鱼外源基因精准编辑技术，为开展鲟鱼基因的功能研究和鲟鱼养殖品种的遗传改良提供了强有力的技术手段。
一种鲟鱼 talen 基因编辑方法

[发明专利]一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法-CN201711282089.5有效
发明人：陈戟;胡红霞;胡炜;朱华;王巍;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所;北京市水产科学研究所
申请日： 2017-12-07 - 公布日： 2020-09-29 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明提供了一种鲟鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法，是将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合后，利用显微注射的方式，注射到受精时间不超过20分钟的鲟鱼1细胞期受精卵的动物极的受精孔中。将100 ng/µL Cas9 nuclease蛋白与30 ng/µL gRNA混合，采用显微注射方法，将混合物导入小体鲟1细胞期受精胚的动物极，孵化后可获得靶基因突变率高达83.1%的小体鲟胚胎，从而建立小体鲟靶基因精准编辑技术。靶基因发生突变的小体鲟胚胎可通过PAGE方法筛选获得。该技术既可以用于研究鲟鱼基因的功能，又可以用于精准修饰鲟鱼内源靶基因，培育遗传改良的鲟鱼养殖新品系。
一种鲟鱼 crispr cas9 基因编辑方法

[发明专利]一种控制黄鳝受精卵第一次卵裂的方法及其应用-CN201711265194.8有效
发明人：胡炜;罗红瑞;冯科;蒋谋炎;侯明喜;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2017-12-05 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种控制黄鳝受精卵第一次卵裂的方法及其应用，该方法是将受精后102~127min内的黄鳝受精卵置于40‑42℃水浴中热休克处理3‑5min以抑制第一次卵裂，从而用于制备四倍体的黄鳝或者人工诱导雌核发育的二倍体黄鳝。本发明针对养殖黄鳝没有品种，种质完全依赖于野生资源的问题，提供了一种控制黄鳝受精卵第一次卵裂的方法，为培育出黄鳝优良养殖品种和品系提供了强有力的技术手段。
一种控制黄鳝受精卵第一次卵裂方法及其应用

[发明专利]一种黄鳝基因编辑的方法-CN201610651812.1有效
发明人：胡炜;冯科;陈戟;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2016-08-10 - 公布日： 2019-11-08 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明公开了一种黄鳝基因编辑的方法，其步骤：1，通过建立室内黄鳝全人工繁殖技术，获得人工授精的黄鳝1细胞期胚胎。2，构建靶基因的类转录激活样效应因子核酸酶基因编辑载体，体外转录合成mRNA后，采用显微注射方法导入黄鳝1细胞期的受精胚中。3，靶基因发生突变的黄鳝可通过三引物检测方法筛选获得，并可通过测序确定靶基因的突变类型。该方法是第一次建立黄鳝胚胎的显微操作技术，第一次建立黄鳝内源基因精准编辑技术，为开展黄鳝基因的功能研究和黄鳝养殖品种的遗传改良提供了强有力的技术手段。
一种黄鳝基因编辑方法

[发明专利]一种用于原始生殖细胞靶向突变的转基因载体及制备方法和用途-CN201510809203.X有效
发明人：熊凤;孙永华;叶鼎;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2015-11-20 - 公布日： 2019-04-02 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于原始生殖细胞靶向突变的转基因载体及制备方法和用途。将本发明提供的载体pTol2(UAS:Cas9)导入单细胞期斑马鱼胚胎，获得的Tg(UAS:Cas9)品系与Tg(kop:KalTA4品系)雌鱼杂交后，获得的杂交胚胎能够在斑马鱼原始生殖细胞中高效、特异、持续表达Cas9基因。在制备突变品系时，以Tg(UAS:Cas9)雄鱼与Tg(kop:KalTA4)雌鱼杂交胚胎作为受体胚胎，直接注射靶向基因的gRNA后，能够有效减少体细胞突变，从而增加注射的P0代胚胎的成活率，同时P0代成鱼能够有效的传递突变，具有广泛应用前景。
一种用于原始生殖细胞靶向突变转基因载体制备方法用途

[发明专利]一种超雄鲤鱼和遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备方法-CN201710315756.9有效
发明人：胡炜;蒋谋炎;李勇明;陶彬彬;陈戟;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2017-05-08 - 公布日： 2018-02-13 - 主分类号： A01K61/10 文献下载
摘要：本发明涉及水产动物遗传育种技术领域，公开了一种超雄鲤鱼和遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备方法，采用该方法可以培育出YY型染色体的超雄鲤鱼，本发明获得了雄核发育的超雄YY鲤鱼，并通过微卫星标记亲子鉴定和测交试验确证。YY鲤鱼与普通雌性鲤鱼杂交产生的后代全部为雄性的鲤鱼，不需要进行鲤鱼性别鉴定，直接对这些已知性别的雄性幼鲤进行人工性反转，获得了遗传雄性而生理雌性的鲤鱼。本发明提供的方法培育出的YY超雄鲤鱼可以应用于控制作为外来种的鲤鱼种群，也可应用于鲤鱼的性别决定与分化等基础研究。遗传雄性而生理雌性鲤鱼的制备技术为进一步研制YY型雌性鲤鱼提供借鉴。
一种鲤鱼遗传雄性生理雌性制备方法

[发明专利]一种提高鱼类omega-3多不饱和脂肪酸的方法及应用-CN201410155088.4有效
发明人：孙永华;庞少臣;王厚鹏;朱作言;康景轩 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2014-04-17 - 公布日： 2014-07-02 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高鱼类omega-3多不饱和脂肪酸的方法及应用，其步骤为：1，构建fat2转基因鱼类家系；2，构建fat1转基因鱼类家系；3，以两个转基因家系为亲本，杂交获得同时表达fat2和fat1基因的富含omega-3多不饱和脂肪酸的双转基因家系。在本方法中，通过转基因引入的fat2和fat1基因填补了鱼类体内从头合成多不饱和脂肪酸通路的断裂，使得转基因鱼获得从头合成omega-3多不饱和脂肪酸的能力，利用该方法可获得高omega-3多不饱和脂肪酸含量的鱼类产品，能有效运用到经济性鱼类的转基因育种中。
一种提高鱼类 omega 不饱和脂肪酸方法应用

[发明专利]一种定向筛选同源重组PGC的载体及构建方法和应用-CN201310341471.4有效
发明人：孙永华;熊凤;魏志强;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2013-08-06 - 公布日： 2013-11-20 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种定向筛选同源重组PGC的载体及制备方法和应用，将表达框UAS:mRFP-UTRnos1和表达框UAS:puma-UTRnos1串联构建出一种可定向筛选同源重组PGC的载体p(UAS:mRFP,UAS:puma)，其序列为SEQIDNO.1所示。该载体具有荧光特异高效标记PGC的作用，又具有促凋亡基因特异剔除PGC的作用。以p(UAS:mRFP,UAS:puma)为载体骨架，将打靶基因同源序列的左右臂分别置于表达框UAS:mRFP-UTRnos1的两侧，并且使表达框UAS:puma-UTRnos1位于同源序列的外侧，制备出同源重组载体。在Tg(kop:KalTA4)胚胎中导入同源重组载体，挑选出在PGC中表达mRFP的胚胎，即为在生殖细胞中发生了同源重组的胚胎。
一种定向筛选同源重组 pgc 载体构建方法应用

[发明专利]一种高效标记斑马鱼PGC的载体及转基因鱼的制备方法和用途-CN201310169181.6无效
发明人：孙永华;熊凤;魏志强;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2013-05-09 - 公布日： 2013-07-31 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效标记斑马鱼PGC的载体及转基因鱼的制备方法和用途。利用Gal4/UAS转录激活系统，以mRFP作为报告基因，实现斑马鱼原始生殖细胞中诱导基因表达调控技术。首先分别构建激活转基因品系Tg(kop:KalTA4)和效应转基因品系Tg(UAS:mRFP)。然后将Tg(kop:KalTA4)雌鱼与Tg(UAS:mRFP)雄鱼杂交就能获得高效标记斑马鱼原始生殖细胞的转基因鱼。这种高效标记斑马鱼原始生殖细胞的转基因鱼在鱼类生物工程具有广泛应用。
一种高效标记斑马 pgc 载体转基因制备方法用途

[发明专利]一种控制鱼类生殖的方法-CN201310049161.5有效
发明人：胡炜;张运生;戴军;朱作言 -专利权人：中国科学院水生生物研究所
申请日： 2013-02-07 - 公布日： 2013-05-08 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明公开了一种控制鱼类生殖的方法，其步骤：A，构建重组基因CMV-eGFP-SV40-CMV-Gal4-SV40，建立转GAL4基因斑马鱼家系；B，构建重组基因CMV-RFP-SV40-UAS-antisensednd，建立转uas-antisensednd基因斑马鱼家系；C，以两个家系的转基因鱼纯合子为亲本杂交，杂交后代鱼生殖败育。本发明通过两系可育而杂交子代诱导不育的策略，建立了一种具有普遍意义的控制鱼类育性的新方法。该方法解决了生殖操作研究中鱼的不育性与性状的可遗传性间的矛盾，能有效运用于鱼类新品种培育和种群控制。
一种控制鱼类生殖方法

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