本发明涉及一种在里氏木霉中提高木聚糖酶产量的方法。本发明以里氏木霉内源蛋白Xyn2作为融合表达元件，将融合表达元件Xyn2和木聚糖酶Xyn10A的编码基因连接至一起，形成融合蛋白基因，然后异源表达该融合蛋白，合成木聚糖酶。所述融合表达元件Xyn2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明方法获得的木聚糖酶酶活明显高于直接表达木聚糖酶Xyn10A，提供的重组里氏木霉xyn2‑xyn10A以葡萄糖为碳源生产的木聚糖酶的酶活达到了170U/mL，同时该菌株以纤维素为碳源生产的木聚糖酶的酶活达到了270U/mL，明显高于使用常用融合表达元件CBHI信号肽和CBHII‑CBM的菌株，是出发菌株的2倍以上，显著提高了里氏木霉菌株胞外培养基中的木聚糖酶酶活水平。
本发明涉及一种里氏木霉转录激活因子Xyr1突变体及其在提高纤维素酶及木聚糖酶产量中的应用。其中里氏木霉转录激活因子突变体Xyr1R434L的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明以里氏木霉Xyr1为基础，将第434位精氨酸突变为亮氨酸，得到里氏木霉转录激活因子突变体Xyr1R434L。该突变体提高了Xyr1的转录激活能力，能够有效促进里氏木霉纤维素酶及木聚糖酶的表达分泌。在过表达突变体Xyr1R434L后，发酵液中纤维素酶酶活及木聚糖酶酶活水平均有大幅度提高，比过表达Xyr1均分别提高了0.8倍。因而里氏木霉转录激活因子突变体Xyr1R434L可以有效提高纤维素酶及木聚糖酶产量，在降低酶的生产成本中具有很大的应用价值。
本发明涉及一种里氏木霉CBHI信号肽突变体及其在促进异源蛋白高效表达分泌中的应用。其中里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以里氏木霉CBHI信号肽为基础，在其第四位赖氨酸之后增加两个亮氨酸，得到里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1。该突变体增强了对异源蛋白的引导能力，能够有效促进异源蛋白XynST11的表达分泌。在异源蛋白XynST11的表达分泌过程中引入里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1后，胞外培养基中XynST11的分泌量和发酵液中由XynST11产生的木聚糖酶酶活水平均有大幅度提高，达到了25U/mL，远远高于CBHI信号肽，因而里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1在促进异源蛋白表达分泌，制备木聚糖酶中具有很大的应用价值。
本发明涉及一株高产3‑岩藻糖基乳糖的基因工程菌及其构建方法与应用。所述基因工程菌同时表达乳糖透性酶、GDP‑甘露糖脱氢酶、GDP‑岩藻糖合成酶和α‑1,3‑岩藻糖基转移酶。所述α‑1,3‑岩藻糖基转移酶为来自Neobacillus cucumis的α‑1,3‑岩藻糖基转移酶，其编码基因为Fut3Bc，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建的基因工程菌，由于α‑1,3‑岩藻糖基转移酶Fut3Bc为优化过的密码子，合成3‑FL的效率更高，且更加适合在酿酒酵母中表达，因此在使用该工程菌以乳糖和半乳糖为底物发酵生产3‑FL时，极大地提高了3‑FL的产量，产量可达0.93g/L，是已报道的常用合成3‑FL的α‑1,3‑FT FutA菌株的5.4倍，为3‑FL的工业化合成提供了重要参考和指导。
