本发明涉及一种在里氏木霉中提高木聚糖酶产量的方法。本发明以里氏木霉内源蛋白Xyn2作为融合表达元件，将融合表达元件Xyn2和木聚糖酶Xyn10A的编码基因连接至一起，形成融合蛋白基因，然后异源表达该融合蛋白，合成木聚糖酶。所述融合表达元件Xyn2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明方法获得的木聚糖酶酶活明显高于直接表达木聚糖酶Xyn10A，提供的重组里氏木霉xyn2‑xyn10A以葡萄糖为碳源生产的木聚糖酶的酶活达到了170U/mL，同时该菌株以纤维素为碳源生产的木聚糖酶的酶活达到了270U/mL，明显高于使用常用融合表达元件CBHI信号肽和CBHII‑CBM的菌株，是出发菌株的2倍以上，显著提高了里氏木霉菌株胞外培养基中的木聚糖酶酶活水平。
本发明涉及一种里氏木霉转录激活因子Xyr1突变体及其在提高纤维素酶及木聚糖酶产量中的应用。其中里氏木霉转录激活因子突变体Xyr1R434L的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明以里氏木霉Xyr1为基础，将第434位精氨酸突变为亮氨酸，得到里氏木霉转录激活因子突变体Xyr1R434L。该突变体提高了Xyr1的转录激活能力，能够有效促进里氏木霉纤维素酶及木聚糖酶的表达分泌。在过表达突变体Xyr1R434L后，发酵液中纤维素酶酶活及木聚糖酶酶活水平均有大幅度提高，比过表达Xyr1均分别提高了0.8倍。因而里氏木霉转录激活因子突变体Xyr1R434L可以有效提高纤维素酶及木聚糖酶产量，在降低酶的生产成本中具有很大的应用价值。
本发明涉及一种里氏木霉CBHI信号肽突变体及其在促进异源蛋白高效表达分泌中的应用。其中里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以里氏木霉CBHI信号肽为基础，在其第四位赖氨酸之后增加两个亮氨酸，得到里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1。该突变体增强了对异源蛋白的引导能力，能够有效促进异源蛋白XynST11的表达分泌。在异源蛋白XynST11的表达分泌过程中引入里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1后，胞外培养基中XynST11的分泌量和发酵液中由XynST11产生的木聚糖酶酶活水平均有大幅度提高，达到了25U/mL，远远高于CBHI信号肽，因而里氏木霉CBHI信号肽突变体SPM1在促进异源蛋白表达分泌，制备木聚糖酶中具有很大的应用价值。
本发明涉及一株高产3‑岩藻糖基乳糖的基因工程菌及其构建方法与应用。所述基因工程菌同时表达乳糖透性酶、GDP‑甘露糖脱氢酶、GDP‑岩藻糖合成酶和α‑1,3‑岩藻糖基转移酶。所述α‑1,3‑岩藻糖基转移酶为来自Neobacillus cucumis的α‑1,3‑岩藻糖基转移酶，其编码基因为Fut3Bc，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建的基因工程菌，由于α‑1,3‑岩藻糖基转移酶Fut3Bc为优化过的密码子，合成3‑FL的效率更高，且更加适合在酿酒酵母中表达，因此在使用该工程菌以乳糖和半乳糖为底物发酵生产3‑FL时，极大地提高了3‑FL的产量，产量可达0.93g/L，是已报道的常用合成3‑FL的α‑1,3‑FT FutA菌株的5.4倍，为3‑FL的工业化合成提供了重要参考和指导。
本发明涉及一种里氏木霉双向启动子BDP1及其应用。所述双向启动子BDP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中首次发现了里氏木霉双向启动子BDP1，通过验证该启动子的功能发现，里氏木霉双向启动子BDP1具有双向启动功能，相较单向启动子具有极大的优势，更具有应用前景。本发明还采用该启动子构建纤维素内切酶和外切酶双向表达盒，进而构建了高产纤维素酶的里氏木霉工程菌。与出发菌株相比，本发明提供的高产纤维素酶的里氏木霉工程菌提高胞外纤维素酶表达量提高了17％以上，对工业中生产纤维素酶具有重要的应用价值。
本发明涉及Trtam1基因在促进里氏木霉高效氮源利用和纤维素酶诱导表达中的应用。本发明属于生物工程技术领域。本发明提供了Trtam1基因在促进里氏木霉高效氮源利用和纤维素酶诱导表达中的应用。所述Trtam1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明发现敲除Trtam1基因的里氏木霉菌株中编码的谷氨酸脱氢酶的基因gdh1的转录水平明显降低，对铵盐的利用能力明显受损。本发明同时发现敲除Trtam1基因的里氏木霉菌株中纤维素酶编码基因和纤维素酶合成水平明显降低，说明Trtam1基因具有提高里氏木霉氮源利用率和纤维素酶表达的作用。
