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[发明专利]一种杨树良种‘泗杨1号’的高效转基因方法-CN202211679920.1在审
发明人： 席梦利;胥猛;程强;潘惠新 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2022-12-26 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种杨树良种‘泗杨1号’的高效转基因方法，属于植物基因工程领域。本发明公开的转基因方法浸染和共培养同时进行，浸染、共培养、筛选培养、抗性芽诱导及伸长培养均在液体培养基中完成。这样添加抗生素和更换培养基时操作简便、减少了培养基的用量，节约实验成本，而且植物材料可以完全浸没在培养基中，使筛选和诱导培养更高效，不仅显著缩短了实验周期，而且避免了假阳性的产生。本发明公开的转基因方法可应用于杨树良种‘泗杨1号’的转基因及功能基因组学研究领域，也可为其它杨树或其它植物的转基因相关研究提供技术参考，具有广阔的应用前景。
一种杨树良种泗杨高效转基因方法

[发明专利]一种基于冰冻切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法-CN202010106601.6有效
发明人： 席梦利;尚大鑫;刘光欣;辛昊阳;赵乙琏;鹿东东;宁仪杭 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-02-20 - 公布日： 2021-01-26 - 主分类号： C12Q1/6841 文献下载
摘要：本发明公开一种基于冰冻切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法包括：获取杨树根尖，用卡诺固定液固定后水洗，再用包埋剂将其包埋并冷冻后切片，将切片粘附到载玻片上，随后经过烤片、变性、杂交、抗体检测等FISH步骤，最后在激光共聚焦显微镜下观察并捕获3D图像。本发明提供的方法可以获得根尖完整的组织结构且FISH信号清晰，相比传统制片方法获得的2D FISH结果，本发明的方法可以在三维水平直观展示染色体在细胞中的真实空间占位，以及在三维水平准确定位靶序列在细胞中的空间分布，可应用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi‑C测序结果的分析等领域，具有广阔的应用前景。
一种基于冰冻切片杨树根尖荧光原位杂交方法

[发明专利]一种基于石蜡切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法-CN202010090059.X有效
发明人： 席梦利;赵乙琏;辛昊阳;鹿东东;刘光欣;尚大鑫;宁仪杭 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-02-12 - 公布日： 2020-12-22 - 主分类号： C12Q1/6841 文献下载
摘要：本发明公开一种基于石蜡切片的杨树根尖3D荧光原位杂交方法，属于分子细胞遗传学领域。本方法主要包括：获取杨树幼嫩根尖，用卡诺固定液固定；正丁醇梯度溶液脱水、浸蜡、包埋；切片、展片、烤片及脱蜡；制片用果胶酶、纤维素酶、胃蛋白酶及RNA酶处理；制片及探针变性、杂交过夜；二抗孵育后检测杂交信号。本发明所提供的方法可以获得杨树根尖石蜡切片清晰的FISH信号，使用激光共聚焦显微镜捕获的3D图像可以准确反映靶序列在细胞中三维水平的空间分布。本发明的方法可用于杨树的染色体空间占位、基因表达及Hi‑C测序结果的分析等研究领域，具有广阔的应用前景。
一种基于石蜡切片杨树根尖荧光原位杂交方法

[发明专利]杨树功能着丝粒组蛋白CENH3的抗原多肽及其应用-CN202010163329.5有效
发明人： 席梦利;宁仪杭;辛昊阳;刘光欣;赵乙琏;尚大鑫 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-03-10 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明公开杨树功能着丝粒组蛋白CENH3的抗原多肽及其应用，属于生物信息学和分子细胞遗传学领域。该发明主要包括：筛选毛果杨CENH3蛋白特异的一段氨基酸序列并人工合成多肽，用该多肽免疫新西兰兔，制备抗血清，亲和纯化后得到CENH3蛋白抗体；抗体通过免疫荧光检测、ChIP‑FISH进行特异性验证，证明了该抗体可以准确识别功能着丝粒。该抗体可以在杨属树种中通用，不仅可以准确标记杨树功能着丝粒的位置，也为开展杨树着丝粒的结构、功能及进化研究奠定基础。本发明在杨树分子细胞遗传学、基因组学及表观组学等研究领域具有广阔的应用前景。
杨树功能着丝粒组蛋白 cenh3 抗原多肽及其应用

[发明专利]一段小叶杨雄株特异的基因组DNA序列及其应用-CN202010159715.7有效
发明人： 席梦利;张韬;尚大鑫 -专利权人：南京林业大学;扬州大学
申请日： 2020-03-09 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： C12Q1/6879 文献下载
摘要：本发明公开了一段小叶杨雄株特异的基因组DNA序列及其应用，属于生物技术领域。通过对小叶杨雌株和雄株基因组进行DNA高通量测序和生物信息学分析，筛选出一段小叶杨雄株特异的基因组DNA序列。依据该小叶杨雄株特异的基因组DNA序列设计引物，以小叶杨和美洲黑杨的基因组DNA为模板，通过PCR扩增结果判断所检测杨树的性别，琼脂糖凝胶电泳检测出目标条带的为雄株，缺失该目标条带的为雌株。本发明提供的小叶杨雄株特异的基因组DNA序列及鉴定杨树植株性别的方法可以高效、准确地鉴定小叶杨和美洲黑杨的性别，在杨树性别鉴定及性别决定的分子机制研究中具有广阔的应用前景。
一段小叶杨特异基因组 dna 序列及其应用

[发明专利]一种毛果杨着丝粒特异的LINE型反转录转座子序列及其应用-CN202010179836.8有效
发明人： 席梦利;辛昊阳;吴玉峰;张文利;宁仪杭;刘光欣 -专利权人：南京林业大学;南京农业大学
申请日： 2020-03-13 - 公布日： 2020-11-10 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开一种毛果杨着丝粒特异的LINE型反转录转座子序列及其应用，属于生物信息学和分子细胞遗传学领域。该发明主要包括：通过对毛果杨着丝粒DNA高通量测序数据的生物信息学分析，筛选出一种着丝粒特异的LINE型反转录转座子序列。依据该序列设计引物，以毛果杨基因组DNA为模板，经PCR扩增、切胶回收获得目的片段。通过探针标记、染色体制片、荧光原位杂交验证了该序列位于着丝粒区。本发明提供的着丝粒特异的LINE型反转录转座子序列不仅可以准确标记杨树着丝粒的位置，以构建高质量核型图，也为开展杨树着丝粒的结构、功能及进化研究奠定基础，在杨树分子细胞遗传学及基因组学研究领域具有广阔的应用前景。
一种毛果杨着丝粒特异 line 转录座子序列及其应用

[实用新型]染色缸-CN201921351125.3有效
发明人：尚大鑫;席梦利 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2019-08-19 - 公布日： 2020-07-10 - 主分类号： G01N1/31 文献下载
摘要：本实用新型提供了一种染色缸，涉及生化实验器具技术领域，该染色缸包括：缸体和支架组件，所述支架组件包括固定座，以及与所述固定座可拆卸连接的支架，所述支架用于支撑载玻片；所述固定座和所述缸体的底面上对应设置有第一连接结构和第二连接结构，以使所述支架组件与所述缸体连接。本实用新型实施例提供的染色缸在使用时，将支架组件放入到缸体内，并与缸体连接。使用者将载玻片插入到支架内，在染色缸内进行染色，染色完毕后，使用者可以将载玻片抽出，然后将支撑组件从缸体内取出，再将支架从固定座上取下。使用者可以将缸体、固定座和支架拆卸后分别进行清洗，减少了清洗死角，缸体、固定座和支架能够更方便地被清洗。
染色

[发明专利]一种大叶杨的组培快繁方法和应用-CN201911020465.2有效
发明人： 席梦利;尚大鑫;宁仪杭;赵乙琏;辛昊阳;郭瑞红 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2019-10-24 - 公布日： 2020-06-09 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种大叶杨的组培快繁方法和应用，包括：以大叶杨幼嫩叶柄为外植体，外植体依次进行不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养和移栽。利用上述的组培快繁方法得到的组培生根苗培养时间短，培养流程简便，提高了大叶杨繁殖的效率；能快速获得遗传性状一致的大叶杨组培生根苗，组培生根苗移栽成活率高。利用组培快繁技术，进行外植体培养，不受季节气候变化、自然灾害的影响，可进行大规模的工业化育苗，利用上述组培快繁方法，可以保持优良基因型的特性不变，从而为大叶杨优良种质资源的保存和利用提供技术保障。
一种大叶杨组培快繁方法应用

[实用新型]一种DNA样品研磨仪及研磨设备-CN201821871847.7有效
发明人：宁仪杭;席梦利 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2018-11-13 - 公布日： 2020-01-17 - 主分类号： C12M1/33 文献下载
摘要：本实用新型提供了一种DNA样品研磨仪及研磨设备，属于实验仪器设备领域。本实用新型通过上述设计得到的DNA样品研磨仪；该研磨仪通过动力装置带动齿轮箱中的齿轮转动，齿轮带动研磨装置快速震动，通过第一齿轮和第二齿轮的啮合，实现变速；达到快速研磨DNA样品的目的。
研磨仪本实用新型齿轮啮合实验仪器设备变速齿轮带动齿轮转动带动齿轮动力装置快速研磨研磨设备研磨装置箱中震动

[发明专利]一种基于浅层液体培养的麝香百合遗传转化方法-CN201711172159.1有效
发明人： 席梦利;赵乙琏;孙惠霖;姜珊;施季森 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2017-11-22 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于浅层液体培养的麝香百合遗传转化方法，包括预培养、菌株活化、农杆菌侵染与共培养、脱菌与筛选培养、分化与抗性苗的获得、体视荧光显微镜观察检测等步骤；本发明以愈伤组织发生能力较强以及愈伤增殖速度较快的麝香百合‘雷山’试管鳞茎的鳞片为实验材料，采取植物细胞薄层切片法，以浅层液体培养为基础，利用根癌农杆菌介导法进行麝香百合遗传转化的研究，将绿色荧光蛋白基因(GFP)转入麝香百合，获得再生植株后采用正置体视式荧光显微镜观测，为百合的基因工程研究提供基础。
一种基于液体培养麝香百合遗传转化方法

[发明专利]一种利用寡核苷酸探针识别杨树全部染色体的方法-CN201910168504.7有效
发明人： 席梦利;辛昊阳;赵乙琏;尚大鑫;宁仪杭 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2019-03-06 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12Q1/6841 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用寡核苷酸探针识别杨树全部染色体的方法，依据毛果杨的基因组信息，通过生物信息学分析获得每条染色体特异的寡核苷酸序列，合成杨树1‑19号染色体对应的寡核苷酸库，然后用生物素或地高辛将其标记成寡核苷酸探针，再通过荧光原位杂交技术识别杨树的染色体，每轮杂交最多同时使用3条染色体的寡核苷酸探针，在同一个中期分裂相上重复进行7次荧光原位杂交，可以准确辨别杨属树种的19对染色体。具有在杨属树种通用、实验重复性好、分辨率高的优点；本发明提供了一种准确识别杨属树种每条染色体的新方法，为杨树的分子细胞遗传学研究奠定了扎实的工作基础。
染色体寡核苷酸探针杨树杨属树种荧光原位杂交技术分子细胞遗传学生物信息学分析寡核苷酸序列荧光原位杂交寡核苷酸库基因组信息实验重复性工作基础地高辛生物素分辨率毛果辨别合成杂交分裂通用重复研究

[实用新型]一种培养装置及可移动的培养装置-CN201821548714.6有效
发明人：宁仪杭;席梦利 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2018-09-20 - 公布日： 2019-08-23 - 主分类号： C12M1/38 文献下载
摘要：本实用新型提供一种培养装置及可移动的培养装置，涉及培养装置技术领域。培养装置包括：相互连接的培养箱和箱门，设置在所述培养箱内的培养槽，设置在所述培养箱内的检测装置、制冷装置和加热装置，以及设置在所述箱门上的控制器；所述制冷装置、加热装置和所述检测装置分别和所述控制器电连接；所述检测装置用于检测培养箱内温度、湿度和二氧化碳浓度；所述培养箱包括侧壁、顶壁和底板，所述箱门关闭使得所述培养装置密闭遮光。
培养装置检测装置加热装置制冷装置可移动培养箱箱门底板本实用新型控制器电控制器培养槽密闭二氧化碳侧壁顶壁遮光检测

[实用新型]培养基制备装置-CN201821579599.9有效
发明人：赵乙琏;席梦利 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2018-09-26 - 公布日： 2019-08-16 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及培养基制备装置，包括实验箱体和设于所述实验箱体内的培养基制备容器、恒温磁力搅拌器、紫外杀菌灯、温度计、分装管和电子蠕动泵，恒温磁力搅拌器和电子蠕动泵设于实验箱体的底部，紫外杀菌灯设于实验箱体的顶部，培养基制备容器的开口处设有容器盖，容器盖上设有加料口、分装口和温度计孔，加料口内插设有加料装置，温度计自所述温度计孔插入培养基制备容器内，分装口内插有分装管，分装管的一端自分装口插入培养基制备容器内，分装管的另一端通过电子蠕动泵通往分装装置。本培养基制备装置能够完整培养基制备的全过程，包括制备、加热、消毒、分装，提高了制备效率且能够有效防止培养基被污染。
培养基制备实验箱体分装管分装电子蠕动泵制备恒温磁力搅拌器紫外杀菌灯温度计孔温度计容器盖本实用新型完整培养基分装装置加料装置培养基加料加料口开口处加热消毒污染

[实用新型]一种制片压片装置及生物实验设备-CN201821764361.3有效
发明人：宁仪杭;席梦利 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2018-10-29 - 公布日： 2019-06-25 - 主分类号： B02C19/00 文献下载
摘要：一种制片压片装置及生物实验设备，属于染色体制片技术领域。制片压片装置包括：底座、支架、驱动装置、第一吸盘和开关，支架与底座转动连接，底座包括凸台，凸台表面为平面，且用于放置载玻片，支架上设置有滴管放置架，滴管放置架与凸台位置对应，驱动装置设置于支架上且驱动装置的驱动端与第一吸盘连接，第一吸盘与凸台的位置对应，凸台表面与第一吸盘的盘面平行，驱动装置驱动第一吸盘向凸台运动，开关与驱动装置电连接。生物实验设备包括上述的制片压片装置。本制片压片装置能够对染色体制片压片，减少实验人员的劳动强度，且实验材料不易损坏。
驱动装置压片装置制片吸盘支架生物实验设备凸台滴管放置架染色体制片凸台表面底座底座转动实验材料凸台位置吸盘连接电连接驱动端载玻片盘面压片平行驱动

[发明专利]一种适于植物染色体rDNA物理定位的探针组合和方法-CN201810928031.1有效
发明人： 席梦利;兰月;辛昊阳;赵乙琏;倪润欣;陈曦 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2018-08-14 - 公布日： 2019-06-18 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种适于植物染色体rDNA物理定位的探针组合和方法；涉及分子细胞遗传学技术领域。该探针组合包括SEQ ID NO.1‑4的探针，分别是5S rDNA探针、5.8S rDNA探针、18S rDNA探针和25S rDNA探针；采用该探针组合及方法进行植物染色体原位杂交，可以捕获到较高分辨率的染色体及荧光原位杂交信号，适用于多种植物的染色体原位杂交；且该探针组合为寡核苷酸探针，具有制作成本低、使用方便、操作简单等特点。
探针组合探针植物染色体物理定位分子细胞遗传学染色体原位杂交寡核苷酸探针荧光原位杂交高分辨率原位杂交染色体捕获制作

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