本发明提供了一种特异性细胞毒性T淋巴细胞的特异性杀伤功能的评估方法，属于免疫治疗领域。其特征在于，包括如下步骤：(1)采用针对待杀伤的靶细胞构建的特异性细胞毒性T淋巴细胞处理靶细胞；(2)采用活细胞成像(Live‑cell Imaging)检测特异性细胞毒性T淋巴细胞对靶细胞的杀伤过程；(3)采用实时无标记细胞分析(Real Time Cellular Analysis，RTCA)检测特异性细胞毒性T淋巴细胞对靶细胞的杀伤效率和杀伤能力；步骤(2)和(3)不分先后顺序，或者，可同时进行。
本发明提供了构建重组MVA病毒的带有标记基因自删除系统的穿梭载体。该穿梭载体携带有痘苗病毒胸腺激酶的侧翼序列TKR与TKL，能插入外源目标病毒基因的多克隆位点MCS，以及启动插入的外源基因高效表达痘苗病毒早晚启动子P7.5，其还携带有两端带有同源序列的自删除标记基因系统。其序列为SEQ ID No.1。利用本发明中的穿梭质粒，可以方便快捷的构建出表达外源目的基因但不带有筛选标记基因的重组MVA病毒。利用本发明中的质粒载体构建的重组MVA病毒，能够满足未来临床试验的需求。为以MVA为基础的活病毒载体疫苗的研发奠定了前期基础。
本发明涉及HPV16L2重组腺病毒疫苗的制备方法。其特征在于，所述腺病毒含有密码子优化型HPV16L2的核苷酸序列SEQ ID No：1，包括如下步骤：使用限制性内切酶EcoRI和HindIII消化重组腺病毒穿梭质粒pDC316，然后将回收片段和同样用内切酶EcoRI和HindIII双酶切的SEQ ID No：1所示的核苷酸片段连接，得到重组腺病毒穿梭质粒pDC316-HPV16L2；用制备的重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒骨架质粒共转染腺病毒包装细胞，得到携带有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列的复制缺陷型重组腺病毒。所述病毒应用于制备预防和治疗HPV病毒引起的子宫颈癌以及食管癌的药物制剂。本发明产生良好的细胞免疫和体液免疫，得到良好的预防效果。
本发明涉及HPV16的1型重组腺相关病毒疫苗及其制备方法。本发明提供一种1型重组腺相关病毒，含有SEQ ID No：1所示的核酸序列。本发明还提供制备上述1型重组腺相关病毒的方法。本发明更进一步提供一种HPV16的1型重组腺相关病毒疫苗，其有效成分为上述1型重组腺相关病毒。本发明提供的HPV16的1型重组腺相关病毒可用于制备治疗和预防子宫颈癌的药物。
