本发明公开了一种大肠杆菌调节蛋白AraC突变体蛋白AraCm及其应用,属于生物医药技术领域。本申请通过随机突变,获得能与戊基二乙酸内酯相结合的突变体AraCm。在此基础上,对突变体AraCm序列进行表征,通过串联BAD启动子介导的抗性基因表达框,得到戊基二乙酸内酯浓度与大肠杆菌菌株生长的关系;或者通过结果表明,通过串联BAD启动子介导的荧光蛋白基因表达框,得到戊基二乙酸内酯浓度与荧光蛋白强度的关系。AraCm的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,AraCm的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。这对检测聚酮合酶突变体催化过程合成副产物戊基二乙酸内酯水平的高通量检测具有重要的应用价值。
本发明公开了一种利用葡萄糖脱氢酶催化麦芽糖合成麦芽糖酸的方法,属于生物医药领域。该方法以大肠杆菌为模板,克隆出葡萄糖脱氢酶基因Ecgdh;构建重组表达葡萄糖脱氢酶基因Ecgdh体系,表达出葡萄糖脱氢酶;再以麦芽糖为底物,以NADH为电子供体,经葡萄糖脱氢酶催化制备麦芽糖酸;所述的葡萄糖脱氢酶基因Ecgdh的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明获得的葡萄糖脱氢酶,与以PQQ为辅因子的醌蛋白葡萄糖脱氢酶相比大大提高,相较于其他醌蛋白葡萄糖脱氢酶对于麦芽糖具有更强的底物偏好性,适合大规模的制备麦芽糖酸,为麦芽糖酸的合成提供了新的方式。