本发明属于生物技术领域，具体为一种具有较髙棒状杆菌复制能力的表达质粒，所述表达质粒的第1786位点的核苷酸为A或G，其余位点与质粒pXMJ19相同；所述表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示。通过在pXMJ19载体的棒状杆菌复制子调节部位，将第1786位点的核苷酸C进行人工突变，成功获得2株比pXMJ19质粒拷贝能力高6～8.5倍的棒状杆菌/大肠杆菌双用载体pXMJ19C1786A和pXMJ19C1786G质粒，pXMJ19C1786A拷贝数约为115，pXMJ19C1786G质粒的拷贝数约为170。
本发明属于生物工程技术领域，公开了一种pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒，采用含塞姆利基森林病毒复制子的载体，并将p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R和M1249L基因分别插入所述载体而得；所述p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R基因序列依次如SEQ ID NO.15‑NO.21所示。该质粒通过插入非洲猪瘟抗原基因(X)，制得的pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒在真核细胞能够高效表达ASFV抗原蛋白，有利于非洲猪瘟鸡尾酒DNA疫苗的研制，也有利于通过Flag抗体胶对这些蛋白进行纯化，制取有别于原核表达的，具备翻译后修饰的高质量抗原蛋白；同时，本发明还公开了该质粒的制备方法和鸡尾酒混合疫苗。
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于敲除cFOS宿主基因的质粒，所述质粒为连接有sgRNA的载体，所述sgRNA包括添加有Bbsl酶切位点的sgRNA‑F和sgRNA‑R；sgRNA‑F如核苷酸序列SEQ ID NO：1所示；sgRNA‑R如核苷酸序列SEQ ID NO：2所示。此外还公开了敲除了cFOS宿主基因的人肺癌细胞系H1299及其制备方法和用途。本发明通过上述方案得到的H1299细胞系对于cFOS宿主基因的把控更为稳定，能够更确切的为cFOS基因及其调控基因的全功能研究。
