本发明公开了一种高效表达菌丝霉素的重组工程菌,其基因组中包含有菌丝霉素四倍串联体,菌丝霉素四倍串联体是由4个编码菌丝霉素的基因片段依次通过编码T2A肽的基因片段串联在一起而成的,其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。其构建方法为:在菌丝霉素N端加6×His标签用于纯化,在菌丝霉素的C端添加T2A肽序列与下一组基因表达盒连接,以此种方式构建菌丝霉素的四倍串联体;将重组表达载体转化至宿主感受态细胞,得到重组工程菌。所述高效表达菌丝霉素的重组工程菌在制备菌丝霉素中的应用,在抑制金黄色葡萄球菌中的应用,在制备抑制金黄色葡萄球菌的制剂中的应用。本发明重组工程菌可高效表达菌丝霉素,具有良好的应用前景。