本发明公开了一种优化后适用于大肠杆菌表达的4‑氯邻苯二酚降解相关的基因簇及其应用。该基因簇包含四个基因,每个基因都由独立的T7启动子和终止子控制,其核苷酸序列分别如SEQ ID No 1、SEQ ID No 2、SEQ ID No 3和SEQ ID No 4所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No 5、SEQ ID No 6、SEQ ID No 7和SEQ ID No 8所示。本发明优化合成的基因能够在大肠杆菌中成功表达,表达这个基因簇的大肠杆菌不仅能够降解4‑氯邻苯二酚,还能够降解邻苯二酚和3‑氯邻苯二酚,因此该基因簇可用于制备降解邻苯二酚,3‑氯邻苯二酚和4‑氯邻苯二酚的微生物。
本发明公开了一种优化后适用于大肠杆菌表达的3‑氯邻苯二酚降解基因簇及其应用。该基因簇包含四个相关基因,每个基因都由独立的T7启动子和终止子控制,其核苷酸序列分别如SEQ ID No 1、SEQ ID No 2、SEQ ID No 3和SEQ ID No 4所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No 5、SEQ ID No 6、SEQ ID No 7和SEQ ID No 8所示。本发明优化合成的基因能够在大肠杆菌中成功表达,发现阳性株系不仅能够降解3‑氯邻苯二酚,还可以降解邻苯二酚和4‑氯邻苯二酚,因此本发明所优化的基因簇可用于制备降解3‑氯邻苯二酚、邻苯二酚和4‑氯邻苯二酚的微生物。
本发明公开了一种优化后适用于大肠杆菌表达的β‑酮己二酸代谢相关的三个基因及其应用。每个基因都由独立的T7启动子和终止子控制,其核苷酸序列分别如SEQ ID No 1、SEQ ID No 2和SEQ ID No 3所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No 4、SEQ ID No 5和SEQ ID No 6所示。本发明优化合成的基因能够在大肠杆菌中成功表达,工程菌能够将β‑酮己二酸完全降解且以β‑酮己二酸为碳源生长,优化后基因可用于构建有机污染修复工程生物。
一种在水稻种子胚乳中表达产生甜菜苷的基因组合及其应用,包括meloS基因、BvDODA1S基因和BvCYP76AD1S基因,进一步,所述meloS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述BvDODA1S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述BvCYP76AD1S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,将三个基因的ORF连接到水稻胚乳特异性球蛋白基因启动子和终止子之间构建基因盒,并将其插入植物双载体中,得到富含甜菜苷的水稻,获得的水稻种子既可以直接用于食用,也可以作为生产甜菜苷的原料种子,对于新型功能性作物育种具有重要的指导意义和生产应用价值。
一种在水稻中表达产生甜菜红素的基因组合及其应用,包括melo基因、BvDODA1基因和BvCYP76AD1基因,根据水稻的密码子偏好性,将melo基因优化为meloS基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;将BvDODA1基因优化为BvDODA1S基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;将BvCYP76AD1基因优化为BvCYP76AD1S基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,分别与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根农杆菌的NOS终止子融合,分别构建对应的基因表达盒,再连接入植物表达载体,获得含上述三基因表达盒的多基因植物转化载体,转化至水稻,获得富含甜菜红素的转基因水稻,其甜菜红素的含量约为2.0‑2.6mg/g FW。
本发明公开了一种优化后适用于大肠杆菌表达的邻苯二酚降解相关的四个基因及其应用。每个基因都由独立的T7启动子和终止子控制,其核苷酸序列分别如SEQ ID No 1、SEQ ID No 2、SEQ ID No 3和SEQ ID No 4所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No 5、SEQ ID No 6、SEQ ID No 7和SEQ ID No 8所示。本发明优化合成的基因能够在大肠杆菌中成功表达,可用于制备降解邻苯二酚的微生物。
本发明公开了一种优化后适用于大肠杆菌表达的苯酚羟化酶基因序列及其应用。编码的苯酚羟化酶由两个亚基组成,每个亚基都由独立的T7启动子和终止子控制,其核苷酸序列分别如SEQ ID No 1和SEQ ID No 2所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No 3和SEQ ID No 4所示。本发明优化合成的基因能够在大肠杆菌中成功表达,可用于制备降解苯酚的微生物。
本发明公开了一种优化后适用于大肠杆菌表达的甲苯单加氧酶基因序列及其应用。编码的甲苯单加氧酶由六个亚基组成,每个亚基都由独立的T7启动子和终止子控制。其核苷酸序列分别如SEQ ID No 1、SEQ ID No 2、SEQ ID No 3、SEQ ID No 4、SEQ ID No 5和SEQ ID No 6所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID No 7、SEQ ID No 8、SEQ ID No 9、SEQ ID No 10、SEQ ID No 11和SEQ ID No 12所示。本发明的基因能够在大肠杆菌中成功表达,可用于制备降解甲苯的微生物。