本发明提供了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域；所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的构建方法，包括以下步骤：1)将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶基因与表达载体连接获得野生型重组载体；2)以获得的野生型重组载体为模板，通过反向PCR定点突变获得3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体重组载体；3)将获得的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体重组载体转化到表达菌株获得重组菌株，培养所述重组菌株获得3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体。所述3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体比酶活为85217.08U/mg，较野生型提高了227.35％。
