本发明提供了一种酶法制备替卡格雷中间体的方法,具体地,所述方法包括步骤:用KRED酶作为催化剂,用化合物28与还原剂反应,得到化合物29。其中,所述的KRED酶具有如SEQ ID NO:3‑SEQ ID NO:16所示的蛋白序列。所述的方法可以高收率,高选择性地得到化合物29,且所得产物可不经进一步纯化用于后续产物的制备。
本发明公开了一种D‑氨基酸氧化酶及其在制备L‑草铵膦或其中间体中的应用。一种D‑氨基酸氧化酶,其氨基酸序列与SEQ ID NO:1相比包含选自以下一个或多个的氨基酸残基差异:K29G/H/I/N/Q/W/Y/C/L;V42C/D/E/H/Y;E195N/Y/Q;C234L;V326W;并具有不低于如SEQ ID NO:1的氨基酸序列所示的D‑氨基酸氧化酶的活性和/或热稳定性。本发明提供了一种热稳定性更高的D‑氨基酸氧化酶,在提高酶活性的同时,也扩大了酶的使用温度范围,且在较低温度下使用,能够延长酶的使用寿命;在较高温度下使用,可提高酶的催化效率。
本发明公开了一种酮还原酶突变体及其应用。所述酮还原酶突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO:3相比,存在第154位氨基酸残基差异;以及,第199位氨基酸残基差异,和/或第203位氨基酸残基差异。本发明还公开了编码所述酮还原酶突变体的核酸、包含所述核酸的重组表达载体以及包含所述核酸或重组表达载体的转化体。本发明还公开了所述酮还原酶突变体的制备方法、包含所述酮还原酶突变体的催化剂。本发明还公开了一种利用所述酮还原酶突变体制备(R)‑1,3‑丁二醇的方法及其应用。本发明所述酮还原酶突变体的酶活性高、立体选择性高、工艺成本更低,用其制备(R)‑1,3‑丁二醇时,在保持较高的转化率和光学纯度的同时,所能够催化的底物浓度更高。
本发明公开了一种L‑苏氨酸醛缩酶及其制备方法与应用。一种L‑苏氨酸醛缩酶,所述L‑苏氨酸醛缩酶与SEQ ID NO:1相比包含选自本发明所述的残基位置处的氨基酸残基差异,并具有不低于如SEQ ID NO:1的氨基酸序列所示的L‑苏氨酸醛缩酶活性。本发明的L‑苏氨酸醛缩酶在制备(2S,3R)‑对甲砜基苯丝氨酸中的底物转化率可达70%以上(优选方案可达80%以上),d.e.值均在90%以上(优选方案可达95%以上),提高了现有L‑苏氨酸醛缩酶的底物转化率和d.e.值,具有产业化应用的价值。
本发明公开了一种脱氢酶及其在制备(R)‑3‑羟基丁酸酯中的应用。所述脱氢酶相比于SEQ ID NO:1包含如下氨基酸残基差异中的一种或多种:Q97V、H145L和Y188F;且具有不低于氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的野生型脱氢酶的活性。本发明制备得到的脱氢酶在制备(R)‑3‑羟基丁酸甲酯或乙酯的应用中,具有很高的转化率和收率,分别可高达99.8%和95%,且制备得到的产物纯度均大于99%,ee值可高达99.8%。
本发明公开了一种环糊精糖基转移酶制备L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷的方法及应用。其中,所述环糊精糖基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明采用环糊精转移酶配合底物Vc,以α‑环糊精、β‑环糊精或麦芽糊精作为糖基供体,以生产L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷,该技术方案实现了L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷产率的提高的同时,实现了Vc的高转化效率,且较之于现有技术本案的生产成本低,对L‑抗坏血酸‑2‑葡萄糖苷的大规模生产起到积极作用。