本发明提供一种靶向猪COL1A1基因下游序列的CRISPR‑Cas9系统及其应用。该系统包含特异性识别猪COL1A1基因3`侧翼区的gRNA以及用于将外源序列整合到该位点的供体载体。本发明提供的gRNA能够识别猪COL1A1基因3`侧翼区如SEQ ID NO：1所示的靶序列。通过所述gRNA的介导，能够使该区域特定位置产生双链断裂，切割效率可达38.2％，通过同时转入本发明提供的Donor‑1、Donor‑2或者Donor‑3载体，可实现外源序列在该位置的定点整合。
本发明涉及基因工程领域，具体而言，提供了一种特异性识别猪COL1A1基因的gRNA及其生物材料、试剂盒和应用。特异性识别猪COL1A1基因的gRNA中负责识别靶片段区域的核苷酸序列为SEQ IDNO.1所示序列，本发明提供的gRNA能够识别猪COL1A1基因编码区下游如SEQ ID NO.5所示的靶序列。通过所述gRNA的介导，能够使Cas9靶向猪基因组上COL1A1基因的第51个外显子末端产生双链断裂，切割效率可达22％，进而实现对COL1A1基因进行编辑，如氨基酸的修饰、替换，或者在该位点插入外源基因表达框，实现外源基因的稳定、高效表达。
